內(nèi)生真菌能夠通過多種方式影響植物的生長和發(fā)育,也能影響植物的代謝過程進而調(diào)控植物細胞的代謝產(chǎn)物狀態(tài)。而在細胞層次上內(nèi)生菌是否依然具有調(diào)控植物細胞次生代謝的效應以及其作用機制并不完全清楚。本研究以從玫瑰蜜和赤霞珠植株中分離得到的8屬21株內(nèi)生真菌以及赤霞珠愈傷組織細胞為研究材料,設計實驗研究了內(nèi)生真菌與赤霞珠愈傷組織細胞共培養(yǎng)的技術(shù)方法,并探討了共培養(yǎng)過程中內(nèi)生真菌與葡萄愈傷組織細胞在生理生化層面的相互作用,重點研究了內(nèi)生真菌對葡萄細胞次生代謝的調(diào)控作用,得到以下結(jié)果：1.以葡萄愈傷組織培養(yǎng)基為基礎,通過對峙培養(yǎng)法和設置雙對照構(gòu)建了葡萄愈傷組織細胞與內(nèi)生真菌的共培養(yǎng)方法體系。該體系可以有效用于葡萄愈傷組織細胞和內(nèi)生真菌在形態(tài)和生理生化層次上的相互作用研究模型。2.研究了不同內(nèi)生真菌與葡萄愈傷組織共培養(yǎng)對兩者生長速率和細胞活性的影響發(fā)現(xiàn),與內(nèi)生真菌共培養(yǎng)均會一定程度抑制愈傷組織的生長和降低細胞的活性,不過抑制的程度不同。菌株RH-16對愈傷組織增長抑制作用最小,抑制率15%。而RH-38對愈傷的增長抑制最大,抑制率達78%。對細胞活性和褐化影響最嚴重的為RH-16,影響最小的為RH-12。... 

【文章來源】：云南大學云南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1.1 葡萄與釀酒葡萄研究簡介
        1.1.1 葡萄屬分類及分布
        1.1.2 葡萄的經(jīng)濟意義
        1.1.3 葡萄品種及在我國的發(fā)展歷程
    1.2 植物內(nèi)生真菌研究概況
        1.2.1 植物內(nèi)生真菌的定義及種類
        1.2.2 內(nèi)生真菌與植物的在代謝上的相互作用
        1.2.3 植物內(nèi)生真菌的應用
        1.2.4 葡萄內(nèi)生真菌的研究現(xiàn)狀
    1.3 植物次生代謝產(chǎn)物研究概況
        1.3.1 植物次生代謝合成途徑
        1.3.2 黃酮類化合物的研究進展
            1.3.2.1 黃酮類化合物的定義及分類
            1.3.2.2 黃酮類化合物的合成及其調(diào)控
            1.3.2.3 黃酮類化合物的生物活性
        1.3.3 葡萄酒中酚類和黃酮類物質(zhì)及其作用
    1.4 本論文的研究目的和意義
第二章 內(nèi)生真菌與葡萄細胞共培養(yǎng)體系的構(gòu)建
    2.1. 材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 赤霞珠愈傷組織的培養(yǎng)及繼代
        2.2.2 內(nèi)生真菌的培養(yǎng)
        2.2.3 內(nèi)生真菌與葡萄愈傷組織的共培養(yǎng)體系構(gòu)建
        2.2.4 內(nèi)生真菌與愈傷組織共培養(yǎng)生長狀況觀測
        2.2.5 真菌生長速率測定
        2.2.6 愈傷組織增長速率的測定
        2.2.7 愈傷組織細胞活性的測定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 不同內(nèi)生真菌與葡萄共培養(yǎng)細胞接觸情況與褐化情況分析
        2.3.2 與葡萄愈傷組織共培養(yǎng)對不同內(nèi)生真菌生長的影響
        2.3.3 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄愈傷組織細胞增殖的影響
        2.3.4 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄愈傷組織細胞活性的影響
        2.3.5 不同內(nèi)生真菌與愈傷組織共培養(yǎng)中各生理指標間的相關(guān)性分析
    2.4 結(jié)論與討論
第三章 葡萄細胞對共培養(yǎng)內(nèi)生真菌的代謝響應
    3.1 實驗材料
    3.2 方法
        3.2.1. 超氧化物歧化酶(SOD)活性測定
        3.2.2 過氧化物酶(POD)活性測定
        3.2.3 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的測定
        3.2.4 丙二醛(MDA)含量測定
        3.2.5. 總蛋白質(zhì)(TPr)含量測定
        3.2.6. 總酚(TPh)含量測定
        3.2.7 可滴定總酸(TTA)的測定
        3.2.8 可溶性總糖(TS)含量的測定
        3.2.9 總黃酮(TF)含量的測定
        3.2.10 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄細胞酚類物質(zhì)的影響
            3.2.10.1 酚類物質(zhì)的萃取
            3.2.10.2 高效液相色譜條件的選擇
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對愈傷組織生理指標的影響
            3.3.1.1 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄細胞SOD活性的影響
            3.3.1.2 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄細胞POD活性的影響
            3.3.1.3 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄細胞PAL活性的影響
            3.3.1.4 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄細胞MDA含量的影響
        3.3.2 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對愈傷組織生化指標的影響
            3.3.2.1 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄細胞總黃酮(TF)含量的影響
            3.3.2.2 不同內(nèi)生真菌對共培養(yǎng)的葡萄細胞總蛋白(TPr)含量的影響
            3.3.2.3 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄細胞總酚(TPh)含量的影響
            3.3.2.4 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄細胞總可溶性糖(TS)含量的影響
            3.3.2.5 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對葡萄細胞總可滴定酸(TTA)的影響
        3.3.3 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)后葡萄細胞各生理生化指標的相關(guān)性分析
        3.3.4 不同內(nèi)生真菌對共培養(yǎng)葡萄細胞生理生化指標影響程度分析
        3.3.5 共培養(yǎng)愈傷組織及菌的生長狀況與細胞生理生化指標的相關(guān)性分析
        3.3.6 基于細胞生理生化響應對不同內(nèi)生真菌進行分類
        3.3.7 不同內(nèi)生真菌對共培養(yǎng)葡萄細胞酚類物質(zhì)代謝的影響
            3.3.7.1 不同內(nèi)生真菌對共培養(yǎng)葡萄細胞酚類物質(zhì)種類的影響
            3.3.7.2 不同內(nèi)生真菌對共培養(yǎng)葡萄細胞酚類化合物相對含量的影響
            3.3.7.3 對細胞活性影響較小的菌株對葡萄細胞酚類物質(zhì)代謝的影響
            3.3.7.4 共培養(yǎng)體系細胞和內(nèi)生真菌生長狀態(tài)及細胞生化指標與細胞獻類物質(zhì)種類
    3.4 結(jié)論與討論
第四章 總結(jié)與展望
    4.1 主要結(jié)論
        4.1.1 構(gòu)建了葡萄愈傷組織細胞與內(nèi)生真菌共培養(yǎng)的體系模型
        4.1.2 共培養(yǎng)體系中不同內(nèi)生真菌的和愈傷組織的生長狀況會相互影響
        4.1.3 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)能夠顯著改變葡萄細胞生理生化指標和代謝途徑
        4.1.4 篩選出對葡萄細胞生理生化影響較大的菌株
        4.1.5 與不同內(nèi)生真菌的共培養(yǎng)可能改變細胞的次生代謝途徑
    4.2 展望
參考文獻
附錄
碩士期間參與項目及發(fā)表論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[4]盾葉薯蕷細胞及內(nèi)生真菌共培養(yǎng)機制研究[D]. 李文謙.南京工業(yè)大學 2004



本文編號：3472725