番茄（Solanum lycopersicum）營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富,風(fēng)味獨(dú)特,深受各國(guó)人民喜愛(ài)。由于其生長(zhǎng)周期短,基因組較小,基因信息豐富,便于遺傳轉(zhuǎn)化,已成為研究果實(shí)發(fā)育的模式植物。目前,我國(guó)市場(chǎng)上的番茄均存在耐儲(chǔ)藏性好但風(fēng)味欠佳的問(wèn)題,改善番茄果實(shí)的風(fēng)味品質(zhì)具有重要市場(chǎng)價(jià)值。影響番茄果實(shí)風(fēng)味的主要因素是果實(shí)中糖分的含量。不過(guò),通過(guò)傳統(tǒng)育種途徑提高番茄果實(shí)糖含量周期長(zhǎng),存在連鎖累贅。因此,定位并克隆控制果實(shí)糖含量的主效基因,進(jìn)而通過(guò)分子標(biāo)記輔助選擇或基因工程技術(shù)對(duì)番茄進(jìn)行遺傳改良,是改善番茄風(fēng)味品質(zhì)的重要途徑。目前,人們對(duì)果實(shí)糖分累積的分子機(jī)理仍缺乏深入的認(rèn)識(shí),而栽培番茄中也缺乏高糖含量的育種資源。前期,我們通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)分析和集群分離法,在醋栗番茄中定位到了控制果實(shí)糖含量的染色體區(qū)段,并進(jìn)行了基因候選,其中包括一個(gè)擴(kuò)張蛋白基因和一個(gè)果糖激酶基因。本研究中,我們對(duì)番茄擴(kuò)張蛋白基因家族和果糖激酶基因家族的表達(dá)模式進(jìn)行了分析,并通過(guò)轉(zhuǎn)基因的方法對(duì)擴(kuò)張蛋白基因SlEXPA3和果糖激酶基因SlFRK2進(jìn)行了初步的功能分析。具體結(jié)果如下:1.根據(jù)番茄擴(kuò)張蛋白基因家族的表達(dá)模式,確定對(duì)SlEXPA7... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?ＥＸＰＡ與ＥＸＰＢ亞家族序列比較??Ｆｉｇ．?１?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?Ｃｏｍｐａｒｉｓｉｏｎ?Ｂｅｔｗｅｅｎ?ＥＸＰＡ?ａｎｄ?ＥＸＰＢ??

（Ｆｒｏｍ?Ｄｏｎｇｓｕ?Ｃｈｏｉ?２００５）??除ＥＸＰＡ和ＥＸＰＢ外，植物中還存在一些與擴(kuò)張蛋白基因序列相似的基因，它們??在氨基酸序列上與ＥＸＰＡ和ＥＸＰＢ相似，但同源性較低（圖２）。盡管從進(jìn)化角度看，??這些蛋白可能與擴(kuò)張蛋白具有相同的祖先，不過(guò)，由于體外試驗(yàn)從未報(bào)道這些蛋白??具有類似擴(kuò)張蛋白的使細(xì)胞壁伸展及應(yīng)力松弛功能，目前并未被納入擴(kuò)張蛋白家族，??僅命名為ＥＸＰ類似（ＥＸＰＬ）或ＥＸＰ相關(guān)（ＥＸＰＲ）蛋白（Ｃｏｓｇｒｏｖｅｅｔａｌ?２００２）。??植物中還存在另一類蛋白，它們的氨基酸序列較短，僅與擴(kuò)張蛋白的其中一個(gè)??結(jié)構(gòu)域（Ｄｏｍａｉｎｌ或Ｄｏｍａｉｎ２）具有同源性。如在相橘中的Ｐ１２－ｌｉｋｅ蛋白，大小約１２??ＫＤ，與擴(kuò)張蛋白的結(jié)構(gòu)域１具有較遠(yuǎn)的同源性，然而并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞壁松弛活性??（Ｃｅｃｃａｒｄｉｅｔａｌ?１９９８）。Ｌｕｄｉｄｉｅｔａｌ?（２００２）推測(cè)，Ｐ１２－ｌｉｋｅ蛋白可能作為多肽類激素??在植物水分和溶質(zhì)平衡的調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮作用。也有報(bào)道發(fā)現(xiàn)Ｇ２Ａ，與ＥＸＰＢ的??Ｄｏｍａｉｎ?２氨基酸序列具有３５－４５％的同源性

的特異引物，以來(lái)自Ａ５７的ｃＤＮＡ為模板進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，得到Ｓ／Ｉ基因完整ＯＲＦ??片段（圖４）。通過(guò)酶切連接反應(yīng)以及ＢＰ反應(yīng)，構(gòu)建了見(jiàn)??別、和５７ＥＡ２５４的植物超量表達(dá)載體（圖５）。??１３??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]溫州蜜柑果實(shí)發(fā)育期間果糖激酶與糖積累的關(guān)系[J]. 秦巧平,張上隆,陳俊偉,吳延軍,陳昆松.  植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào). 2004(04)



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