蘋果莖溝病毒（Apple stem grooving virus）、蘋果莖痘病毒（Apple stem pitting virus, ASPV）和蘋果褪綠葉斑病毒（Apple cholortotic leaf spot virus, ACLSV）是侵染梨樹的三種主要病毒,單一病毒侵染栽培梨時,通常不表現(xiàn)出明顯的癥狀,而兩種或三種病毒復(fù)合侵染時,有的梨樹葉片表現(xiàn)出褪綠斑、脈黃、畸形及卷曲等明顯癥狀。目前,培育和栽培無病毒苗木是防治果樹病毒病的有效措施,因此,果樹病毒病的檢測和診斷具有非常重要的作用。建立靈敏、快速和高通量的病毒檢測可為無病毒種苗的繁育提供技術(shù)。本研究建立了檢測3種梨病毒ASGV、ASPV和ACLSV的實時熒光定量RT-PCR （Reverse transcriptional real time fluorescent quantitative, qRT-PCR）技術(shù)及ASPV和ACLSV的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP）技術(shù),研究結(jié)果如下：1、本研究... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表(Abbreviations)
第一章 文獻綜述
    1.1 三種梨病毒的危害特點
    1.2 三種梨病毒的分子特性
    1.3 果樹病毒檢測技術(shù)研究進展
        1.3.1 核酸分子雜交技術(shù)
        1.3.2 雙鏈RNA(dsRNA)技術(shù)
        1.3.3 基因芯片技術(shù)
        1.3.4 實時熒光定量PCR技術(shù)
        1.3.5 LAMP技術(shù)
    1.4 研究目的和意義
第二章 三種梨病毒實時熒光定量RT-PCR檢測技術(shù)
    2.1 材料
        2.1.1 供試材料
        2.1.2 試劑及儀器
    2.2 研究方法
        2.2.1 引物設(shè)計
        2.2.2 總RNA的提取
        2.2.3 Dnase Ⅰ消化
        2.2.4 RT-PCR擴增
        2.2.5 基因克隆
        2.2.6 引物用量及反應(yīng)溫度的優(yōu)化
        2.2.7 陽性質(zhì)粒標準品的構(gòu)建
        2.2.8 標準曲線的繪制
        2.2.9 qRT-PCR引物特異性檢測
        2.2.10 qRT-PCR引物靈敏度驗證
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 三種梨病毒qRT-PCR檢測引物的篩選
        2.3.2 引物用量對PCR擴增反應(yīng)的影響
        2.3.3 溫度梯度對PCR擴增反應(yīng)的影響
        2.3.4 溶解曲線的分析
        2.3.5 標準曲線的繪制
        2.3.6 重復(fù)性
        2.3.7 qRT-PCR檢測ASGV、ASPV和ACLSV效果評價
        2.3.8 qRT-PCR檢測梨三種病毒的效果
    2.4 結(jié)果與討論
第三章 ACLSV和ASPV兩種病毒的RT-LAMP技術(shù)
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試材料
        3.1.2 主要試劑與儀器
    3.2 研究方法
        3.2.1 引物設(shè)計
        3.2.2 總RNA提取
        3.2.3 RT-PCR擴增
        3.2.4 RT-LAMP反應(yīng)體系的建立及優(yōu)化
        3.2.5 LAMP擴增產(chǎn)物檢測
        3.2.6 RT-LAMP特異性檢測
        3.2.7 RT-LAMP檢測引物靈敏度驗證
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 ACLSV和LAMP檢測引物的篩選
        3.3.2 RT-LAMP檢測ACLSV和ASPV反應(yīng)體系的優(yōu)化
        3.3.3 RT-LAMP檢測ACLSV和ASPV效果評價
    3.4 結(jié)果與討論
第四章 結(jié)論與展望
參考文獻
附錄A Real-time RT-PCR與單一RT-PCR檢測梨樣品三種病毒
附錄B RT-LAMP與單一RT-PCR檢測梨樣品三種病毒結(jié)果
致謝


【參考文獻】：
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本文編號：3457298