本文以北陵鳶尾ItDREB2基因為研究對象,以pBI121-It DREB為載體,分別對煙草和擬南芥進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,并對轉(zhuǎn)基因煙草和擬南芥在干旱、高鹽脅迫下葉綠素含量、SOD活性、POD活性等生理指標(biāo)進(jìn)行測定;以pBI121-ItDREB-GFP為載體轉(zhuǎn)化擬南芥,進(jìn)行亞細(xì)胞定位;利用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)分析轉(zhuǎn)基因煙草下游基因調(diào)控表達(dá);對轉(zhuǎn)基因煙草形態(tài)學(xué)變化和生長發(fā)育狀況進(jìn)行觀測。研究結(jié)果如下:1.根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo),分別獲得具有抗卡那霉素的轉(zhuǎn)基因煙草和擬南芥抗性植株,經(jīng)PCR和Northern雜交鑒定外源ItDREB2基因被整合到煙草和擬南芥的基因組中并成功表達(dá)。2.選取轉(zhuǎn)ItDREB2基因的煙草和擬南芥抗性植株進(jìn)行干旱、高鹽脅迫處理,測定出轉(zhuǎn)ItDREB2基因煙草和擬南芥植物體內(nèi)葉綠素含量、SOD活性、POD活性都比非轉(zhuǎn)基因煙草和擬南芥高,轉(zhuǎn)基因煙草和擬南芥抗干旱、高鹽能力得到了提高。3.利用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)分析在干旱和高鹽脅迫處理下ItDREB2基因相關(guān)下游基因的調(diào)控表達(dá),結(jié)果顯示,在非逆境下,多數(shù)候選基因表達(dá)量上調(diào),在經(jīng)過鹽脅迫處理后Lea5、ERD10B、P5CS... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)ItDREB2基因煙草Fig.2-1TransgenictobaccowithItDREB2gene通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化煙草，篩選出具有抗卡那霉素的抗性芽（如圖2-1A），然

圖 2-1 轉(zhuǎn) ItDREB2 基因煙草Fig.2-1Transgenic tobacco with ItDREB2 gene農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化煙草，篩選出具有抗卡那霉素的抗性芽（如圖續(xù)培養(yǎng)生根（如圖 2-1B），將生根的無菌苗移栽在培養(yǎng)土中培養(yǎng)（（如圖 2-1B），最終得到轉(zhuǎn)基因煙草 42 株。REB2 基因煙草的鑒定DREB2 基因煙草 PCR 鑒定所示。在這幾個轉(zhuǎn)基因株系和陽性對照中，在 795bp 處都有擴這說明外源基因已轉(zhuǎn)到了煙草中。

進(jìn)行比較如圖2-4 顯示：圖 2-4A 為 200mmol/LNaCl 處理 0d 時，轉(zhuǎn)基因煙草各株系生長良好，底葉無白化；圖 2-4B 是處理 15d 時，此時轉(zhuǎn)基因各株系和非轉(zhuǎn)基因煙草苗底葉開始白化，且白化程度 WT＞L9＞L8＞L1；圖 2-4C 為處理 30d 時，野生型煙草 WT 底葉完全白化，而轉(zhuǎn)基因各株系白化程度較輕；因此可以看出轉(zhuǎn)基因煙草的耐鹽性較野生型煙草有了明顯提高。圖 2-4 轉(zhuǎn) ItDREB2 基因煙草耐鹽性盆栽比較Fig.2-4Comparison of salt tolerance of transgenic tobacco with ItDREB2 gene2.3.3.2 轉(zhuǎn) ItDREB2 基因煙草抗旱性盆栽比較自然干旱處理轉(zhuǎn)基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草幼苗，進(jìn)行比較如圖 2-5 顯示：圖 2-5A為自然干旱處理 0d 時，轉(zhuǎn)基因煙草各株系生長良好，底葉生長正常；圖 2-4B 是處理 7d時，此時轉(zhuǎn)基因各株系和非轉(zhuǎn)基因煙草苗底葉開始變黃，且變黃程度 WT＞L9＞L1＞L8；圖 2-5C 為處理 15d 時

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]干旱脅迫對楊樹品種2025及其2個芽變品種葉片光合生理特征的影響[J]. 張江濤,晏增,楊淑紅,馬永濤,朱鏑.  中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報. 2017(03)
[2]干旱脅迫對宮粉羊蹄甲生理指標(biāo)的影響[J]. 唐洪輝,魏丹,趙慶,胡柔璇.  中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報. 2017(04)
[3]準(zhǔn)噶爾無葉豆EsDREB2B基因在煙草中的抗逆功能分析[J]. 李士敏,李小雙,楊紅蘭,張道遠(yuǎn).  分子植物育種. 2016(02)
[4]外源NO調(diào)控鹽脅迫下蒺藜苜蓿種子萌發(fā)生理特性及抗氧化酶的研究[J]. 劉文瑜,楊宏偉,魏小紅,劉博,王高強,吳偉濤.  草業(yè)學(xué)報. 2015(02)
[5]Improved salt tolerance of Populus davidiana × P. bolleana overexpressed LEA from Tamarix androssowii[J]. Yanshuang Sun,Su Chen,Haijiao Huang,Jing Jiang,Shuang Bai,Guifeng Liu.  Journal of Forestry Research. 2014(04)
[6]ABA緩解水稻孕穗期干旱脅迫生理特性的分析[J]. 郭貴華,劉海艷,李剛?cè)A,劉明,李巖,王紹華,劉正輝,唐設(shè),丁艷鋒.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(22)
[7]鹽脅迫下豌豆幼苗對內(nèi)外源NO的生理生化響應(yīng)[J]. 時振振,李勝,楊柯,馬紹英,劉會杰,張品南,楊曉明.  草業(yè)學(xué)報. 2014(05)
[8]非生物逆境相關(guān)基因在棉花抗逆研究中的進(jìn)展[J]. 雷志,周美亮,吳燕民.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報. 2014(02)
[9]土壤干旱脅迫對沙棘葉片光合作用和抗氧化酶活性的影響[J]. 裴斌,張光燦,張淑勇,吳芹,徐志強,徐萍.  生態(tài)學(xué)報. 2013(05)
[10]干旱脅迫下4種委陵菜屬植物葉片的超微結(jié)構(gòu)[J]. 吳建慧,崔艷桃,趙倩竹.  草業(yè)科學(xué). 2012(11)

博士論文
[1]轉(zhuǎn)AtDREBlA基因草地早熟禾適應(yīng)干旱及旱后復(fù)水的生理生化響應(yīng)[D]. 李飛飛.北京林業(yè)大學(xué) 2015
[2]擬南芥chyB和DREB2A基因?qū)D(zhuǎn)基因煙草抗逆的研究[D]. 趙清.天津大學(xué) 2013
[3]鹽堿脅迫下水稻OsAPX家族基因表達(dá)特性差異研究[D]. 管清杰.東北林業(yè)大學(xué) 2007
[4]大豆DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及功能研究[D]. 李雪平.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004
[5]水稻DREB轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及相關(guān)研究[D]. 田秀紅.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]轉(zhuǎn)LbDREB基因大青楊抗旱及耐鹽性分析[D]. 李墨野.東北林業(yè)大學(xué) 2016
[2]北陵鳶尾（Iris typhifolia Kitag.）DREB轉(zhuǎn)錄因子的克隆及其對煙草的遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 李雪.東北林業(yè)大學(xué) 2015
[3]花生干旱脅迫響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子DREB1基因的轉(zhuǎn)化研究[D]. 翟迎慧.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[4]大豆DREB/CBF轉(zhuǎn)錄因子GmDREB1A的克隆及功能鑒定[D]. 李艷杰.吉林大學(xué) 2014
[5]玉米DREB1/CBF轉(zhuǎn)錄因子的克隆及其抗逆功能分析[D]. 周偉.吉林大學(xué) 2013
[6]冰凌花轉(zhuǎn)錄因子AaDREB1基因的表達(dá)分析及功能鑒定[D]. 宗俊梅.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[7]花生中DREB、bZIP類轉(zhuǎn)錄因子耐逆性研究[D]. 黃聰.哈爾濱師范大學(xué) 2010
[8]番茄LeDREB1轉(zhuǎn)錄因子基因在轉(zhuǎn)基因擬南芥中的功能分析[D]. 王迎波.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010
[9]小麥DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因的表達(dá)與抗逆功能分析[D]. 鄭甲成.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010
[10]大豆轉(zhuǎn)錄因子GmDREB的功能分析[D]. 王曉飛.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2008



本文編號：3400374