蠟梅【Chimonanthus praecox（L.）Link】為蠟梅科蠟梅屬的落葉喬灌木植物,是我國(guó)特產(chǎn)的傳統(tǒng)名花,具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和觀賞價(jià)值。CAF1是一種脫腺苷酸酶,在m RNA降解中起著重要作用,脫腺苷酸化作用是大多數(shù)真核細(xì)胞m RNA降解的第一步。m RNA降解可以對(duì)過(guò)時(shí)的m RNA進(jìn)行及時(shí)清除,同時(shí)對(duì)發(fā)生突變有害的m RNA進(jìn)行降解,能夠保證細(xì)胞正常的生命活動(dòng),也可以引起基因表達(dá)變化、改變生物學(xué)性狀,作為基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的關(guān)鍵步驟之一,對(duì)生物轉(zhuǎn)錄組重建起重要作用。目前僅有擬南芥、辣椒和水稻CAF1基因功能的研究報(bào)導(dǎo),其結(jié)果表明該基因在植物的生長(zhǎng)發(fā)育及生物和非生物脅迫的應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮重要作用。1.CpCAF1基因的結(jié)構(gòu)特征和編碼蛋白特征在以構(gòu)建的蠟梅花c DNA文庫(kù)基礎(chǔ)上,通過(guò)隨機(jī)測(cè)序的方法獲得CpCAF1基因的c DNA序列。DNAstar軟件分析發(fā)現(xiàn),獲得的c DNA序列包含一個(gè)807bp的完整開(kāi)放閱讀框（Open Reading Frame,ORF）;Prot Param軟件在線預(yù)測(cè)結(jié)果表明:蠟梅CpCAF1基因編碼269個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子式為C1371H2087N... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 蠟梅研究進(jìn)展
        1.1.1 我國(guó)蠟梅栽培簡(jiǎn)史
        1.1.2 世界蠟梅屬植物的種類與分布
        1.1.3 中國(guó)蠟梅屬植物的種類與分布
        1.1.4 蠟梅的品種分類研究進(jìn)展
        1.1.5 蠟梅的生物學(xué)特性
        1.1.6 蠟梅分子生物學(xué)研究
        1.1.7 蠟梅的應(yīng)用研究
    1.2 mRNA降解的研究進(jìn)展
        1.2.1 mRNA的降解方式
    1.3 脫腺苷酸化酶的研究進(jìn)展
    1.4 CAF1基因的研究進(jìn)展
第2章 引言
    2.1 研究背景
    2.2 研究目的、內(nèi)容和意義
    2.3 研究技術(shù)路線
第3章 蠟梅脫腺苷酸化酶基因CpCAF1的克隆和分子特征分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 蠟梅cDNA文庫(kù)及植物材料
        3.1.2 菌株與載體
        3.1.3 主要試劑及試劑盒
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
        3.1.5 自配的主要試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 EST序列特征分析及目標(biāo)克隆子的鑒定
        3.2.2 蠟梅脫腺苷酸酶基因CpCAF1 cDNA序列的獲得
        3.2.3 蠟梅脫腺苷酸化酶基因CpCAF1的生物信息學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 蠟梅CpCAF1基因全長(zhǎng)cDNA的獲得及其序列特征
        3.3.2 蠟梅CpCAF1基因編碼蛋白同源性分析
        3.3.3 蠟梅CpCAF1基因編碼蛋白的基本特征預(yù)測(cè)分析
    3.4 討論
第4章 蠟梅CpCAF1基因的表達(dá)特性分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 蠟梅不同組織、不同時(shí)期及不同脅迫處理材料的采集
        4.2.2 總RNA的提取及cDNA第一鏈的獲得
        4.2.3 CpCAF1基因表達(dá)特性的實(shí)時(shí)熒光定量分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 蠟梅總RNA提取
        4.3.2 CpCAF1基因的表達(dá)特性分析
    4.4 討論
第5章 蠟梅CpCAF1基因表達(dá)載體的構(gòu)建及擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 載體及菌株
        5.1.3 試劑盒及主要試劑
        5.1.4 自配的主要試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 蠟梅CpCAF1基因植物超表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.2.2 農(nóng)桿菌EHA105凍融法感受態(tài)的制備
        5.2.3 凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105感受態(tài)細(xì)胞
        5.2.4 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化子的PCR鑒定及反轉(zhuǎn)化大腸桿菌鑒定
        5.2.5 花序侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥
        5.2.6 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選鑒定
        5.2.7 轉(zhuǎn)CpCAF1基因擬南芥的表型觀察
        5.2.8 轉(zhuǎn)CpCAF1基因擬南芥的冷害脅迫研究
        5.2.9 非損傷微測(cè)技術(shù)
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 蠟梅CpCAF1基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.3.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選鑒定
        5.3.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥表型觀察
        5.3.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的冷害脅迫研究
        5.3.5 CpCAF1基因?qū)M南芥鉀分子機(jī)理
    5.4 討論
        5.4.1 蠟梅CpCAF1基因參與擬南芥的生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控
        5.4.2 蠟梅CpCAF1基因增強(qiáng)擬南芥抗寒性
        5.4.3 蠟梅CpCAF1基因影響擬南芥根系對(duì)鉀離子吸收
第6章 總結(jié)
    6.1 主要結(jié)果
        6.1.1 CpCAF1基因的結(jié)構(gòu)特征和編碼蛋白特征
        6.1.2 CpCAF1基因在蠟梅中的表達(dá)特征分析
        6.1.3 CpCAF1基因轉(zhuǎn)擬南芥的遺傳研究
    6.2 下一步計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3342957