香蕉束頂病毒（Banana bunchy top virus,BBTV）引起的束頂病是香蕉上的一種重要病毒病,香蕉束頂病最早于1889年在斐濟(jì)發(fā)現(xiàn),后陸續(xù)在其他國家和地區(qū)被發(fā)現(xiàn)。20世紀(jì),該病威脅著全世界25%香蕉產(chǎn)區(qū)的生產(chǎn),主要包括亞洲、非洲和南太平洋地區(qū),成為香蕉上重要的毀滅性病害之一。香蕉病毒病是導(dǎo)致香蕉病害的重要原因,為了正確認(rèn)識并有效防控病毒病的發(fā)生,本文采用了電子透射顯微鏡技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)對病毒對植物葉綠體的影響進(jìn)行了研究。本研究通過超薄切片電鏡觀察技術(shù)對感染BBTV以及健康對照組香蕉葉柄的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較分析,希望對植物病毒侵染寄主的研究有一定的推動作用。另外,通過分子生物學(xué)檢測方法對香蕉進(jìn)行檢測,分別獲得感染BBTV香蕉葉片以及健康香蕉葉片的葉綠體基因組序列。之后通過軟件對兩組全基因組序列進(jìn)行數(shù)據(jù)分析以及基因注釋,了解感病后香蕉葉綠體基因的變化。此外,本實驗還通過熒光定量PCR的相對定量對感染BBTV香蕉葉片以及健康香蕉葉片的葉綠體基因組拷貝數(shù)進(jìn)行測定。這對今后BBTV對香蕉植株的影響研究奠定了基礎(chǔ)。本研究結(jié)果表明,電鏡下可明顯看出:與完整的葉綠體形態(tài)形成鮮明的對比... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１感染ＢＢＴＶ香蕉植株的外部病癥．（莊軍，２０１５）??Ａ，感病香蕉葉柄部“青筋”；Ｂ，健康香蕉葉柄部；Ｃ，生長滯緩感病株．??

?福建農(nóng)林大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文???圖１－２?ＬＳＶ感染百合的典型癥狀．（徐品三等，２０１４）??Ａ，健康百合葉綠體；Ｂ，感病百合葉綠體??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｔｙｐｉｃａｌ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?ＬＳＶ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｌｉｌｙ??Ａ，?Ｈｅａｌｔｈｙ?ｌｉｌｙ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ．；Ｂ，Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ?ｌｉｌｙ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ．??１．３實時熒光定量ＰＣＲ技術(shù)及其應(yīng)用??１．３．１熒光定量ＰＣＲ原理??實時熒光定量ＰＣＲ技術(shù)簡單的來講就是在定量ＰＣＲ的基礎(chǔ)上，將可見的??熒光基團(tuán)加入擴(kuò)增的反應(yīng)體系之中，然后通過實時監(jiān)測擴(kuò)增過程，每收集到一個??焚光信號即表７Ｆ經(jīng)過了一個循環(huán)過程。根據(jù)這個原理，在ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ結(jié)束之??后，可以獲得對應(yīng)的熒光擴(kuò)增曲線，然后根據(jù)這條曲線可以對實驗未知樣本進(jìn)行??定量分析。??在一般情況下，在ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ－ＰＣＲ中的擴(kuò)增曲線主要包括三個重要時期：一??是熒光背景信號期，二是熒光信號指數(shù)增長期，三是熒光信號平臺期（邵勤等，??２０１３）。在第一時期，擴(kuò)增的熒光信號被掩蓋，無法判斷出目的基因產(chǎn)物量的實??時變化；在第二時期，可以很明顯的看出擴(kuò)増產(chǎn)物呈指數(shù)增長模式；在第三個時??期，產(chǎn)物停止增長。在擴(kuò)增曲線中，ＰＣＲ的產(chǎn)物量只與第二時期的增長有線性??關(guān)系，即只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增的時期，產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量有線性??關(guān)系。因此，所謂的熒光定量ＰＣＲ分析主要是對指數(shù)增長階段進(jìn)行分析。??在實時熒光定量ＰＣＲ技術(shù)中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號超過所設(shè)定的閾值時所??經(jīng)過的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)被稱為ＣＴ值。國內(nèi)外研宄表明，在ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?Ｐ

?福建農(nóng)林大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文???２．２結(jié)果與分析??ｍｍ?＞?＇．：??ｗ＾－?ｍ－??圖２－１葉綠體電鏡圖．??Ａ，健康香蕉葉柄葉綠體；Ｂ，感染ＢＢＴＶ香蕉葉柄葉綠體．??Ｆｉｇ．２－１?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ．??Ａ，?Ｐｅｔｉｏｌｅ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ?ｏｆ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｂａｎａｎａ?；??Ｂ，?Ｐｅｔｉｏｌｅ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ?ｏｆ?ｂａｎａｎａ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＢＢＴＶ．??在超薄透射電鏡下觀察到：Ｂ圖中感染ＢＢＴＶ的香蕉葉柄葉綠體外膜嚴(yán)重受??損（黑色箭頭）、葉綠體內(nèi)部呈現(xiàn)空泡化（白色箭頭）、基粒片層膨脹，葉綠體??基質(zhì)排列稀疏，與Ａ圖中呈現(xiàn)梭形完整的葉綠體形態(tài)形成鮮明的對比，得出結(jié)??論，ＢＢＴＶ侵染香蕉后其葉柄葉綠體的形態(tài)發(fā)現(xiàn)明顯變化。??１５??

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3334365