山楂（Crataegus pinnatifida Bge.）是薔薇科（Rosaceae）山楂屬（Crataegus spp.）果樹。作為我國重要的果樹種質資源之一,其自交不親和機制的研究尚未見報道,而‘紫珍珠’作為目前發(fā)現的唯一山楂自交親和性的種質資源,為探究山楂自交親不和性的分子機制及山楂屬植物的自交不親和機制提供了重要的研究材料。本研究一方面利用薔薇科果樹基因組數據庫對核酸酶數據進行生物信息學分析,分別在5’UTR和3’UTR區(qū)域設計引物克隆‘紫珍珠’S-RNase基因,并通過NCBI數據庫、Lasergene、MEGA7.0和SWISS MODLE軟件進行同源比對、結構分析、系統(tǒng)進化樹分析和蛋白三級結構分析;另一方面設計‘紫珍珠’的自交及雜交授粉試驗,通過對自交和雜交后代群體的遺傳分析,來討論其自交親和性突變的原因。結果如下:（1）從‘紫珍珠’中克隆出兩條長度分別為960 bp和843 bp的全長S-RNase基因序列,分別命名為ZZZS₁-RNase和ZZZS₂-RNase。登錄到GeneBank的ID分別為MG385836和MG38... 

【文章來源】：河北科技師范學院河北省

【文章頁數】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

山楂‘紫珍珠’S-RNase基因PCR擴增產物電泳圖

本研究中克隆得到的 ZZZS1-RNase 基因中含有 1 個大小為 276 bp 的內含子，外顯子序列可編碼 227 個氨基酸殘基；ZZZS2-RNase 基因含有 1 個大小為 162 bp的內含子，外顯子序列可編碼 226 個氨基酸殘基。據 BLAST 比對分析結果確定ZZZS1-RNase 和 ZZZS2-RNase 基因均屬于 RNase T2 基因家族。通過 SignalP 預測信號肽，使用 NCBI 的 CDD（Conserved Domain Database）對 ZZZS1-RNase 和ZZZS2-RNase 進行保守結構域分析，結果表明，‘紫珍珠’ZZZS1-RNase 和ZZZS2-RNase 與蘋果屬、梨屬、李屬 S-RNase 氨基酸序列結構相似，都具有保守的結構域和高變區(qū)。保守結構域共 5 個（C1、C2、C3、RC4 和 C5），高變區(qū)（HV）1 個，位于保守區(qū) C2 和 C3 之間，前端都帶有１個信號肽（圖 4）。第一個保守區(qū)域位于第 29-45 氨基酸殘基之間；第二個保守區(qū)域位于第 58-67 氨基酸殘基之間；第三個保守區(qū)域位于 114-131 氨基酸殘基之間；第四個保守區(qū)域位于 142-156氨基酸殘基之間；第五個保守區(qū)域位于 171-180 氨基酸殘基之間，其中高變區(qū)位于 78-89 氨基酸殘基之間。

17進化距離刻度標尺=0.1；Scale bar=0.1;圖 5 S-RNases 系統(tǒng)進化樹Fig. 5 Phylogenetic tree of S-RNases.5 山楂 S-RNase 基因的空間三級結構對‘紫珍珠’花柱 ZZZS1-RNase 和 ZZZS2-RNase 基因的氨基酸進行維空間結構模擬，利用 SWISS MODEL 在線預測，搜索包含在 SM

【參考文獻】：
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