梨是我國(guó)的重要果樹(shù)樹(shù)種之一,選育具有優(yōu)良性狀的矮化砧木對(duì)于梨樹(shù)生產(chǎn)具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。利用植物基因工程是擴(kuò)大現(xiàn)有砧木種質(zhì)資源的重要途徑,但首先要建立穩(wěn)定的再生系統(tǒng)。為此,本研究分別以梨的矮化砧木云南榅桲（Cydonia oblonga Mill.）和OHF333（Pyrus communis）為實(shí)驗(yàn)材料,建立了云南榅桲的葉片再生和薄層細(xì)胞（Thin cell layer,TCL）再生體系,并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將參與梨花青苷合成的PbMYB9基因?qū)隣HF333的基因組中。主要結(jié)果如下:1.云南榅桲離體葉片高效再生體系的建立以云南榅桲離體葉片為外植體,研究了不同濃度的TDZ和NAA組合、不同暗培養(yǎng)時(shí)間及取材部位對(duì)葉片再生不定芽的影響。結(jié)果表明,云南榅桲葉片再生不定芽的最適組合為選取試管苗頂部幼嫩葉片,放置于含有0.5 mg/L NAA和1.0 mg/L TDZ的MS培養(yǎng)基上,暗培養(yǎng)20d,葉片再生頻率最高為88.9%,平均再生芽數(shù)為7.97。葉片再生苗在生根培養(yǎng)基1/2 MS+NAA 0.3 mg/L,暗培養(yǎng)5d,生根率為85.6%,平均生根條數(shù)為3.1。2.云南榅桲薄層細(xì)胞再生體系的建立... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 梨矮化砧木利用和研究進(jìn)展
        1.1.1 榅桲屬砧木的研究
        1.1.2 梨屬砧木的研究
    1.2 榅桲的組織培養(yǎng)研究進(jìn)展
        1.2.1 榅桲離體葉片再生的研究進(jìn)展
        1.2.2 薄層培養(yǎng)的研究進(jìn)展
    1.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的梨的遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
        1.3.1 取得轉(zhuǎn)化成功的梨品種
        1.3.2 梨中轉(zhuǎn)入的外源基因類型
        1.3.3 轉(zhuǎn)化成功的外植體類型
        1.3.4 影響梨遺傳轉(zhuǎn)化的因素
    1.4 MYB轉(zhuǎn)錄因子在花青苷合成中的研究進(jìn)展
        1.4.1 花青苷的生物合成
        1.4.2 花青苷合成中的MYB轉(zhuǎn)錄因子
        1.4.3 MYB轉(zhuǎn)錄因子的遺傳轉(zhuǎn)化研究
    1.5 研究的目的和意義
第二章 云南榅桲離體再生體系的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 云南榅桲莖段離體培養(yǎng)
        2.2.2 云南榅桲葉片再生體系的建立
        2.2.3 云南榅桲TCL再生體系的建立
        2.2.4 培養(yǎng)條件
        2.2.5 再生體系的統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 云南榅桲離體葉片不定芽再生動(dòng)態(tài)過(guò)程
        2.3.2 不同濃度的TDZ和NAA組合對(duì)葉片再生不定芽的影響
        2.3.3 暗培養(yǎng)時(shí)間對(duì)葉片再生不定芽的影響
        2.3.4 不同取材部位對(duì)葉片再生不定芽的影響
        2.3.5 不同質(zhì)量濃度的NAA對(duì)不定芽生根的影響
        2.3.6 云南榅桲TCL再生的動(dòng)態(tài)過(guò)程
        2.3.7 不同質(zhì)量濃度的TDZ和NAA對(duì)TCL再生的影響
        2.3.8 TCL再生不定芽的倍性檢測(cè)
    2.4 討論
        2.4.1 云南榅桲離體葉片再生體系的優(yōu)化
        2.4.2 薄層培養(yǎng)再生體系的優(yōu)化
    2.5 小結(jié)
第三章 OHF333的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 農(nóng)桿菌菌株及質(zhì)粒
        3.1.2 植物材料
        3.1.3 遺傳轉(zhuǎn)化基本培養(yǎng)基
        3.1.4 細(xì)菌培養(yǎng)基
    3.2 方法
        3.2.1 農(nóng)桿菌的活化和工程菌液的制備
        3.2.3 侵染與共培養(yǎng)
        3.2.4 延時(shí)篩選和篩選培養(yǎng)
        3.2.5 抗性愈傷的增殖
        3.2.6 抗性愈傷的PCR檢測(cè)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 抗性愈傷的獲得
        3.3.2 抗性愈傷的PCR檢測(cè)
    3.4 討論
        3.4.1 菌株和受體類型對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
        3.4.2 預(yù)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響
        3.4.3 共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
        3.4.4 受體材料對(duì)抗生素的敏感性
        3.4.5 誘導(dǎo)抗性愈傷分化不定芽
    3.5 小結(jié)
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文縮寫(xiě)詞
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3319237