植物的生長(zhǎng)發(fā)育會(huì)受到生物脅迫和非生物脅迫的影響,在脅迫條件下,植物會(huì)在生理和分子水平做出應(yīng)答反應(yīng),對(duì)逆境表現(xiàn)出不同的抗性。miRNA在植物生長(zhǎng)發(fā)育、脅迫應(yīng)答和激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮了重要作用。本研究以錦橙、資陽(yáng)香橙、飛龍枳實(shí)生苗和錦橙/資陽(yáng)香橙、錦橙/飛龍枳嫁接苗為試驗(yàn)材料,對(duì)16個(gè)可能響應(yīng)嫁接的miRNA及其靶基因,在柑橘葉片和根系中進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè),分析嫁接前后的表達(dá)差異;對(duì)不同砧穗的嫁接苗和實(shí)生苗柑橘的韌皮部進(jìn)行小RNA測(cè)序,通過(guò)生物信息學(xué)和分子生物學(xué)分析等手段,篩選差異和特異表達(dá)的miRNA,挖掘能夠進(jìn)行長(zhǎng)距離轉(zhuǎn)運(yùn)的miRNA;同時(shí)對(duì)柑橘植株進(jìn)行堿脅迫處理,測(cè)定葉片中脯氨酸（Pro）和丙二醛（MDA）的含量,及過(guò)氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）的酶活性,以及miRNA和對(duì)應(yīng)靶基因的表達(dá)量。通過(guò)以上研究,分析柑橘砧穗互作的分子機(jī)制,闡明miRNA參與調(diào)控的耐堿機(jī)理。主要研究結(jié)果如下:1、嫁接后4個(gè)月（2016年7月15日）,待接穗長(zhǎng)出10片葉左右時(shí),采集實(shí)生苗和嫁接苗的葉片和根系,提取total RNA,利用熒光定量PCR檢測(cè)16個(gè)miRN... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

（a、b、c和d）實(shí)生苗和嫁接苗葉片中miRNA和靶基因的相對(duì)表達(dá)量Fig.2-1(a,b,c,d)RelativeexpressionaftergraftingofmiRNAandtargetgenesinleavesofseedlingsandgraftedplants注：JC-L:錦橙葉片；JC/ZY-L:錦橙/資陽(yáng)香橙葉片；JC/FL-L:錦橙/飛龍枳葉片*：p<0.05；**：p<0.01

圖 2-2（a、b、c 和 d）實(shí)生苗和嫁接苗根系中 miRNA 和靶基因的相對(duì)表達(dá)量-2(a, b, c, d) Relative expression after grafting of miRNA and target genes in roots of sand grafted plantsC-R: 錦橙根系；ZY-R:資陽(yáng)香橙根系；JC/ZY-R:錦橙/資陽(yáng)香橙根系；FL-R:飛龍枳JC/FL-R:錦橙/飛龍枳根系 *：p<0.05；**：p<0.01 2-2 結(jié)果顯示，與資陽(yáng)香橙實(shí)生苗相比，錦橙嫁接到資陽(yáng)香橙砧木后系中的 miR535、miR160、miR393、miR395、miR398 和 miR827 表達(dá)余 miRNA 的表達(dá)量下降。在錦橙/飛龍枳嫁接苗中，與實(shí)生苗相比，中參與植物生長(zhǎng)發(fā)育的 miR156、miR162、miR168、miR403 表達(dá)上調(diào)iR156 是嫁接前的 2.15 倍；參與激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的 miR160 和 miR164 的表與植物脅迫應(yīng)答的 miRNA 的變化不一致，miR395 的表達(dá)量增加了 4.798、miR399a、miR408 和 miR827 呈現(xiàn)出下調(diào)表達(dá)，miR535 和 miR39的表達(dá)基本不變。砧木實(shí)生苗相比，T159 和 T162 在嫁接錦橙后的資陽(yáng)香橙和飛龍枳砧均上調(diào)，嫁接后 miR159 的表達(dá)量分別是嫁接前的 2.48 倍和 1.96 倍。T、T397、T399a 和 T403 在嫁接后的資陽(yáng)香橙和飛龍枳砧根系中均表達(dá)不大。其余靶基因在嫁接后的資陽(yáng)香橙和飛龍枳砧根系中表達(dá)不一致

圖 3-1 10 個(gè)小 RNA 文庫(kù)中 miRNA 的長(zhǎng)度分布Fig. 3-1 Length distribution of ten sRNA libraries嫁接的 miRNA夠響應(yīng)嫁接的 miRNA，比較了實(shí)生苗錦橙、資陽(yáng)香橙、香橙、錦橙/飛龍枳韌皮部中 miRNA 的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)一化。miRNA 表達(dá)變化倍數(shù)用 FC 表示。以|FC|≥2 為臨行差異基因的篩選。言，在錦橙/資陽(yáng)香橙砧穗組合中，嫁接后上調(diào)表達(dá)的 miR393、miR394、miR398、miR408、miR473、miR477b、下調(diào)表達(dá)的有 5 個(gè)，它們分別是 miR390、chr2_6634、chrhrUn_49409。在錦橙/飛龍枳砧穗組合中，嫁接后上調(diào)表達(dá)iR171b、miR172c、miR394、miR395、miR398、miR477b、ch chrUn_36721；下調(diào)表達(dá)的 miRNA 有 14 個(gè)，有 miR397、m99d、miR399e、chr2_6634、chr3_12157、chr4_14286、chrr6_23591、chr7_26117、chrUn_35191、和 chrUn_49109。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3300734