馬藺（Iris lactea Pall. var. chinensis （Fisch.） Koidz.）是鳶尾科鳶尾屬多年草本植物,主要野生分布于我國東北、西北、華北等地,馬藺具有極強抗旱耐鹽性,并已經(jīng)成為退化低地鹽生草甸的指示性植物之一,因其葉色青綠,綠期長,花色淡雅倩麗,管理粗放,已經(jīng)成為城市園林景觀配置和郊野公園綠地建設(shè)的優(yōu)良地被植物。本課題組經(jīng)對馬藺ISSR841-320標(biāo)記位點測序后,發(fā)現(xiàn)與其他植物液泡膜H+-PPase基因VP同源性達60%以上,其中與大麥H+-PPase基因HvVP同源性高達80%。H+-PPase基因定位在液泡膜上,與H+-ATPase共同承擔(dān)質(zhì)子泵的作用,構(gòu)成H+跨膜電化學(xué)梯度,將細胞質(zhì)中多余的無機離子區(qū)域化到液泡中,減輕無機離子對植物的傷害。本研究以馬藺為實驗材料,采用cDNA末端快速擴增（RACE）技術(shù),獲得馬藺IlVP的全長cDNA序列;利用原子吸收分光光度計和real-time RT-PCR技術(shù),對不同濃度NaCl處理下馬藺地下部和地上部中的IlVP表達水平進行定量分析;采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法,將馬藺IlVP基因?qū)霟煵軼38中,共獲得... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．４?Ｒｅａｌ?Ｔｉｍｅ?ＰＣＲ擴増反應(yīng)程序??

９５ｔ：?５?Ｓｏ??４Ｘ：保存??圖２．４?Ｒｅａｌ?Ｔｉｍｅ?ＰＣＲ擴増反應(yīng)程序??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｒｅａｌ?Ｔｉｍｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?代ａｃｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ??３實驗結(jié)果與分析??３．１馬巧總ＲＮＡ提取?，胃＿??Ｗ馬商地下部根系為材料提取根部總ＲＮＡ。經(jīng)檢測顯示，得到兩條清晰條帶，分??別為２８ＳＲＮＡ和１８ｓＲＮＡ?（圖２．５），２８ｓＲＮＡ約２倍亮于１８ｓＲＮＡ，且無拖尾，可證明??所得到的總ＲＮＡ完整性較好；經(jīng)核酸蛋白檢測儀測得〇〇２８０／〇〇２６０平均值為１．％，可??用于盾續(xù)實驗。??■??—?２８?泳ＮＡ??＂＊＊＾３—ＩＳｓＲＮＡ??ｆ??圖２．５馬菌總民ＮＡ凝膠電泳檢測??Ｆｉｇｕｒｅ?２．５?Ｔｈｅ?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?／ｒ／ｓ?／ｏｃ化口??３．２馬淸／／Ｗ基因核心片段擴増結(jié)果??馬簡ｃＤＮＡ為模板進行ＰＣＲ擴增。擴増產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳檢測，得到約在９００?ｂｐ長度??的單一亮帶，與目的片段的大小一致（圖２．６），經(jīng)測序結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，陽性克隆序列長??度為８９３?ｂｐ，編碼巧７個氨基酸（圖２．７）。??２１??

ｂｐ??圓??圖２．７陽性克�。校妹耔b定??Ｆｉｇｕｒｅ?２．７?ＰＣＲ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏ打?ｏｆ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｌｏｎｅｓ??注：２，３－陽性克��；Ｍａｒｌｃｅｒ－ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ??Ｎｏｔｅ：?２，?３－Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｌｏｎｅｓ；?Ｍａｒｋｅｒ－ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ??３．３馬窗ＷＦ戶基因３＇ＲＡ巧擴增結(jié)果??Ｗ３＇ＲＡＣＥｃＤＮＡ為模板，使用３＇ＶＰＦｌ與３＇ＶＰＲｌ引物進行巢式ＰＣＲ，凝膠電泳??檢測外側(cè)ＰＣ民產(chǎn)物沒有條帶，內(nèi)側(cè)ＰＣ民擴增產(chǎn)物得到約為１０００?ｂｐ的ＤＮＡ特異性目的??片段（圖２．８），測序結(jié)果顯示陽性克隆序列（圖２．９）長度為１１１７ｂｐ。??２２??

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]農(nóng)桿菌介導(dǎo)AVP1基因轉(zhuǎn)化甜菜的研究[D]. 王曉嬌.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]AVP1基因轉(zhuǎn)化百脈根及其轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽抗旱性研究[D]. 程星.蘭州大學(xué) 2009
[3]黃瓜4種α-半乳糖苷酶的Southern雜交及表達分析[D]. 馬靜靜.揚州大學(xué) 2008
[4]披堿草（Elymus dahuricus）氫離子焦磷酸化酶基因EdHP1的克隆及功能鑒定[D]. 董建輝.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008
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[6]KCl處理對鹽地堿蓬液泡膜H～+-ATPase和H～+-PPase活性的影響[D]. 李圓圓.山東師范大學(xué) 2005
[7]NaCl脅迫對鹽地堿蓬根、莖、葉液泡膜H～+-ATPase和H～+-PPase活性的影響[D]. 包華音.山東師范大學(xué) 2004
[8]鹽地堿蓬SsVP和SsMAPKK基因的克隆與功能鑒定[D]. 尹海波.山東師范大學(xué) 2003
[9]NaCl和KCl脅迫對堿蓬生長及液泡膜質(zhì)子泵活性的效應(yīng)[D]. 楊明峰.山東師范大學(xué) 2002



本文編號：3299597