本研究以鐵高效基因型蘋果砧木小金海棠（Malus xiaojinensis Cheng et Jiang）為試材,以從中克隆得到一個(gè)新的檸檬酸合成酶基因（CS）為研究對象,利用已公布的蘋果金冠全基因組序列圖譜的檸檬酸合成酶基因序列保守區(qū)設(shè)計(jì)兼并引物,用Trizol法提取小金海棠的RNA,在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下反轉(zhuǎn)錄合成單鏈c DNA,通過巢式PCR擴(kuò)增的方法獲得小金海棠CS基因片段,區(qū)別于之前從小金海棠中克隆得到的Mx CS1基因,將該基因命名為Mx CS2。測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)Mx CS2基因的開放閱讀框全長為891bp,利用DNAMAN5.2軟件將測序獲得的核苷酸序列翻譯為氨基酸序列,推測Mx CS2基因負(fù)責(zé)編碼一個(gè)由296個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì),預(yù)測其分子量約為33.2k Da,理論等電點(diǎn)為7.79。對Mx CS2蛋白的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,該蛋白的功能結(jié)構(gòu)域包含有三個(gè)α螺旋和三個(gè)無規(guī)則卷曲,亞細(xì)胞定位顯示Mx CS2蛋白定位于線粒體和細(xì)胞質(zhì)膜上。利用NCBI網(wǎng)站中的blast功能進(jìn)行Mx CS2基因和其他物種的CS基因的氨基酸和核苷酸相似性分析,得到同源進(jìn)化樹,Mx CS2與Mx CS1和Pp ... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 鐵元素的研究概況
        1.1.1 微量元素的簡介
        1.1.2 鐵元素的簡介
        1.1.3 植物吸收鐵的兩種機(jī)理的研究
        1.1.4 鐵吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的研究
    1.2 檸檬酸合成酶的研究
    1.3 小金海棠鐵高效機(jī)理的研究
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 總RNA的提取
        2.2.2 c DNA第一條鏈的合成
        2.2.3 基因全長的獲得
        2.2.4 目的基因的電泳及純化
        2.2.5 目的基因的連接和轉(zhuǎn)化
        2.2.6 MxCS2基因的序列分析
        2.2.7 MxCS2蛋白的亞細(xì)胞定位
        2.2.8 MxCS2基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析
        2.2.9 擬南芥轉(zhuǎn)化試驗(yàn)
        2.2.10 萌發(fā)與生長試驗(yàn)
        2.2.11 相關(guān)生理指標(biāo)的測定
3 結(jié)果與分析
    3.1 MxCS2基因片段的克隆與表達(dá)分析
        3.1.1 總RNA的提取
        3.1.2 c DNA的合成
        3.1.3 MxCS2基因全長的獲得與分析
        3.1.4 MxCS2蛋白的三維結(jié)構(gòu)分析與亞細(xì)胞定位
    3.2 MxCS2的功能性研究和分析
        3.2.1 MxCS2基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥T3代植株的鑒定分析
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥相關(guān)生理指標(biāo)的測定
4 討論
    4.1 MxCS2基因的克隆與表達(dá)分析
    4.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥對鐵脅迫的反應(yīng)及相關(guān)生理指標(biāo)的測定
    4.3 蘋果屬檸檬酸合成酶家族基因的比較
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]蘋果再生體系建立與MxIrt1基因功能的初步研究[D]. 王憶.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[2]缺鐵脅迫下小金海棠根特異蛋白的表達(dá)鑒定及MxSAMS基因克隆[D]. 郭函子.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[3]蘋果鐵高效基因型生物技術(shù)的研究——MxNrampl和MxIrtl基因的克隆[D]. 戚金亮.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003

碩士論文
[1]小金海棠三價(jià)鐵還原酶基因克隆與表達(dá)分析[D]. 張蕓.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3286029