文心蘭（Oncidiumhybridum）為蘭科（Orchidaceae）文心蘭屬植物,被插花界譽(yù)為切花"五美人"之一,具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。文心蘭在栽培過(guò)程中極易感染病害,尤其是由歐文氏菌（Erwinia spp）引起的軟腐�。⊿oft rot）更是文心蘭產(chǎn)業(yè)的毀滅性病害,但至今卻仍無(wú)特別有效的防治方法,因此選育抗軟腐病的文心蘭品種是文心蘭育種的重要方向。鐵氧還蛋白（Ferredoxin,FD）作為一個(gè)大的基因家族在植物中普遍存在,現(xiàn)已證實(shí)Fd基因可幫助水稻、煙草、擬南芥以及文心蘭在內(nèi)的許多植物獲得廣譜抗性。本研究以文心蘭’小櫻桃’為材料,利用蘭花基因組數(shù)據(jù),通過(guò)RT-PCR以及RACE技術(shù)克隆獲得2條文心蘭抗軟腐病相關(guān)的鐵氧還蛋白基因,并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR以及轉(zhuǎn)化文心蘭原球莖的研究,對(duì)這兩個(gè)基因進(jìn)行初步的功能驗(yàn)證。本研究的主要結(jié)果如下:1文心蘭離體培養(yǎng)優(yōu)化以文心蘭’小櫻桃’的PLBs為材料,研究不同添加量的香蕉泥對(duì)文心蘭PLBs增殖的影響,結(jié)果表明:以1/2MS+1 g/L活性炭+50g/L香蕉泥時(shí)增殖系數(shù)最高,高達(dá)5.41,且原球莖顏色鮮綠,長(zhǎng)勢(shì)緊密均一沒(méi)有出現(xiàn)分化的情況;研究... 

【文章來(lái)源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：125 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮寫詞
摘要
Abstract
第一章 引言
    1 文心蘭離體快繁研究進(jìn)展
    2 文心蘭轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展
        2.1 文心蘭轉(zhuǎn)基因研究
        2.2 文心蘭轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究
    3 植物Fd與FNR研究進(jìn)展
        3.1 Fd基因研究進(jìn)展
        3.2 FNR基因研究進(jìn)展
        3.3 Fd與FNR間的相互作用關(guān)系
    4 鐵氧還蛋白的在抗病作用中的研究進(jìn)展
        4.1 鐵氧還蛋白在抗軟腐病作用中的發(fā)現(xiàn)
        4.2 鐵氧還蛋白抗性作用機(jī)理的研究進(jìn)展
            4.2.1 鐵氧還蛋白的結(jié)構(gòu)域?qū)剐援a(chǎn)生作用
            4.2.2 光對(duì)鐵氧還蛋白的抗性產(chǎn)生作用
            4.2.3 不同亞細(xì)胞定位的鐵氧還蛋白作用不同
    5. 本研究的意義及主要內(nèi)容
        5.1 研究意義
        5.2 主要內(nèi)容
第二章 文心蘭原球莖離體培養(yǎng)優(yōu)化
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 原球莖增殖優(yōu)化
            1.2.2 原球莖分化優(yōu)化
    2 結(jié)果與分析
        2.1 不同添加量的香蕉泥對(duì)文心蘭原球莖增殖的影響
        2.2 激素及添加物和接種量對(duì)文心蘭分化的影響
    3 討論
        3.1 適量的香蕉泥有助于文心蘭'小櫻桃'PLBs增殖
        3.2 適宜的天然添加物有助于文心蘭PLBs分化
第三章 文心蘭鐵氧還蛋白相關(guān)基因的克隆與生物信息學(xué)分析
    第一節(jié) 文心蘭鐵氧還蛋白(Fd)相關(guān)基因的克隆
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 基于文心蘭轉(zhuǎn)錄組的Fd基因家族分析
            2.2 文心蘭OnFd和OnFNR基因克隆
            2.3 文心蘭OnFd基因開放閱讀框克隆及同源性分析
            2.4 文心蘭OnFNR同源性分析
            2.5 OnFd基因與OnFNR基因結(jié)構(gòu)分析
        3 討論
    第二節(jié) 文心蘭OnFd與OnFNR基因的生物信息學(xué)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 OnFd與OnFNR基本理化性質(zhì)分析
            2.2 OnFd與OnFNR信號(hào)肽預(yù)測(cè)
            2.3 OnFd與OnFNR跨膜螺旋結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與分析
            2.4 OnFd與OnFNR磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)
            2.5 OnFd與OnFNR卷曲螺旋結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            2.6 OnFd與OnFNR二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            2.7 OnFd與OnFNR蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            2.8 OnFd與OnFNR保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)
            2.9 OnFd與OnFNR系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
        3 討論
            3.1 文心蘭植株中Fd與FNR的類型
            3.2 OnFd基因與OnFNR基因之間可能形成功能互補(bǔ)
第四章 文心蘭OnFd與OnFNR基因表達(dá)模式分析
    第一節(jié) OnFd與OnFNR基因在文心蘭不同組織部位的表達(dá)模式
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 OnFd在不同組織部位的表達(dá)模式
            2.2 OnFNR在不同組織部位的表達(dá)模式
        3 討論
            3.1 文心蘭OnFd可能參與植株的開花調(diào)控
            3.2 文心蘭OnFNR屬于光合型FNR
    第二節(jié) 激素和非生物脅迫處理下文心蘭OnFd與OnFNR的表達(dá)模式
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 生長(zhǎng)素處理下文心蘭OnFd與OnFNR的表達(dá)模式
            2.2 脫落酸處理下文心蘭OnFd與OnFNR的表達(dá)模式
            2.3 赤霉素處理下文心蘭OnFd與OnFNR的表達(dá)模式
            2.4 水楊酸處理下文心蘭OnFd與OnFNR的表達(dá)模式
            2.5 鹽脅迫處理下文心蘭OnFd與OnFNR的表達(dá)模式
            2.6 聚乙二醇處理下文心蘭OnFd與OnFNR的表達(dá)模式
        3 討論
            3.1 文心蘭OnFd與OnFNR在抵抗軟腐病過(guò)程中可能與激素信號(hào)途徑共同作用
            3.2 OnFd與OnFNR可能參與文心蘭脅迫響應(yīng)
第五章 文心蘭OnFd與OnFNR基因在感染軟腐病后不同階段的表達(dá)模式
    第一節(jié) 軟腐病菌的提取與侵染
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 軟腐病病原菌的鑒定與分析
            2.2 軟腐病病原菌侵染文心蘭后植株癥狀的分析
        3 討論
    第二節(jié) 文心蘭OnFd與OnFNR基因在不同感病階段的表達(dá)模式
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 文心蘭不同組織部位在5個(gè)不同感病階段中OnFd表達(dá)分析
            2.2 文心蘭不同組織部位在5個(gè)不同感病階段中OnFNR表達(dá)分析
        3 討論
            3.1 OnFd可能在文心蘭抵御軟腐病菌入侵過(guò)程中發(fā)揮著重要作用
            3.2 根在OnFNR抵御軟腐病菌過(guò)程中起到輔助的作用
第六章 文心蘭OnFd與OnFNR的亞細(xì)胞定位分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 目的基因酶切位點(diǎn)的分析
        2.2 重組載體的構(gòu)建與鑒定
        2.3 OnFd蛋白的亞細(xì)胞定位
        2.4 OnFNR蛋白的亞細(xì)胞定位
    3 討論
第七章 文心蘭OnFd與OnFNR基因轉(zhuǎn)化文心蘭
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 文心蘭PLBs的抗性培養(yǎng)
        2.2 GUS化學(xué)染色
        2.3 轉(zhuǎn)基因PLBs分子檢測(cè)
        2.4 轉(zhuǎn)基因PLBs中,GUS表達(dá)量的變化
        2.5 轉(zhuǎn)基因PLBs中,OnFd與OnFNR表達(dá)量的變化
        2.6 轉(zhuǎn)基因PLBs中SOD基因表達(dá)量的變化
        2.7 軟腐病病原菌侵染文心蘭轉(zhuǎn)基因PLBs
    3 討論
        3.1 OnFd與OnFNR相互作用
        3.2 過(guò)表達(dá)OnFd與OnFNR的PLBs較抑制OnFd與OnFNR表達(dá)的PLBs抗軟腐病能力更強(qiáng)
        3.3 SOD基因的表達(dá)與OnFd、OnFNR基因的表達(dá)密切相關(guān)
        3.4 抑制OnFd與OnFNR基因的表達(dá)可能會(huì)提高文心蘭的抗逆性
第八章 結(jié)論與展望
    1、結(jié)論
    2、展望
參考文獻(xiàn)
附錄A 圖版及圖版說(shuō)明
附錄B 文心蘭OnFd與OnFNR基因cDNA序列
附錄C 文心蘭軟腐病病原菌菌cDNA
在學(xué)碩士期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]盆花文心蘭叢生芽組培快繁技術(shù)研究[J]. 葉秀仙,黃敏玲,羅遠(yuǎn)華,林榕燕,鐘淮欽.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2016(11)
[2]整合序列與蛋白相互作用特征的亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)[J]. 王明會(huì),龔藝,王強(qiáng),馮煥清,李驁.  電子科技大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(03)
[3]不同栽培基質(zhì)對(duì)文心蘭組培苗生長(zhǎng)的影響[J]. 王安石,林明光,陳施明,韓松,潘英文.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2015(03)
[4]切花文心蘭花梗芽組培快繁技術(shù)研究[J]. 王安石,韓松,陳施明,潘英文,林明光.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(04)
[5]桃生長(zhǎng)素酰胺水解酶基因家族序列特征及其表達(dá)分析[J]. 潘磊,曾文芳,牛良,魯振華,崔國(guó)朝,王志強(qiáng).  園藝學(xué)報(bào). 2015(02)
[6]文心蘭的組織培養(yǎng)及生理特性的初步研究[J]. 曹云英,侯海濤,劉宇杰,周蓉,趙華.  北方園藝. 2014(21)
[7]植物活性氧的產(chǎn)生及其作用和危害[J]. 張夢(mèng)如,楊玉梅,成蘊(yùn)秀,周滔,段曉艷,龔明,鄒竹榮.  西北植物學(xué)報(bào). 2014(09)
[8]應(yīng)用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化文心蘭叢生芽增殖培養(yǎng)體系[J]. 葉秀仙,黃敏玲,羅遠(yuǎn)華,吳建設(shè),林兵.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(09)
[9]不同添加物對(duì)文心蘭原球莖增殖及試管苗生長(zhǎng)的影響[J]. 江金蘭.  亞熱帶植物科學(xué). 2012(04)
[10]蝴蝶蘭細(xì)菌性軟腐病病原鑒定[J]. 肖愛(ài)萍,游春平,向梅梅.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(15)

博士論文
[1]龍眼胚性培養(yǎng)物抗性相關(guān)基因的克隆與功能鑒定[D]. 葉煒.福建農(nóng)林大學(xué) 2015
[2]稻瘟菌誘導(dǎo)性水稻OsFd和OsFNR基因的cDNA克隆與誘導(dǎo)表達(dá)[D]. 耿麗華.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004
[3]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)SAG12-ipt和3DN-iaaL基因轉(zhuǎn)化切花菊及抗早衰研究[D]. 鄭麗.西南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003

碩士論文
[1]文心蘭乙烯代謝相關(guān)基因克隆與表達(dá)及ACO功能驗(yàn)證[D]. 李玲.福建農(nóng)林大學(xué) 2014
[2]轉(zhuǎn)基因蘭花培養(yǎng)物繼代保持及文心蘭ACO基因克隆與表達(dá)分析[D]. 林鶴延.福建農(nóng)林大學(xué) 2012
[3]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)ACS反義基因轉(zhuǎn)化文心蘭的研究[D]. 金蘋.福建農(nóng)林大學(xué) 2009



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