木耳（A uricularia auricula）是兼具食用價(jià)值與藥用價(jià)值的食用菌之一,具有很大的研究價(jià)值。但是由于日前全面停止商業(yè)采伐,導(dǎo)致木耳生長所需的木屑原料出現(xiàn)短缺,更有可能導(dǎo)致木耳產(chǎn)業(yè)的停滯。我國是農(nóng)業(yè)大國,每年有大量的農(nóng)業(yè)秸稈產(chǎn)生,秸稈的成分主要是半纖維素,而木耳是木腐菌,降解纖維素的能力很強(qiáng),對半纖維素的降解能力較弱,想要利用農(nóng)業(yè)秸稈中的半纖維素就需要提高木耳降解半纖維素的能力,半纖維素的降解主要由p-1,4-內(nèi)切木聚糖酶、p-木糖苷酶、a-L-阿拉伯呋喃糖苷酶、α-葡萄糖醛酸苷酶以及乙酰木聚糖酯酶的協(xié)同作用完成,其中a-L-阿拉伯呋喃糖苷酶作用于半纖維素的側(cè)鏈,在半纖維素降解過程中具有重要的作用。本研究對木耳體內(nèi)的a-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因進(jìn)行研究,以期得到a-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因的表達(dá)蛋白,提高a-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因在木耳體內(nèi)的表達(dá)量,主要研究了以下幾個內(nèi)容。（1）對實(shí)驗(yàn)室保存的木耳栽培菌株DL202提取其總RNA并進(jìn)行RNA-Seq技術(shù)分析�；谀径D(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),篩選出在半纖維素降解過程中具有重要作用的a-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因,利用RACE技術(shù)克隆全長... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 課題研究的目的和意義
    1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.2.1 半纖維素酶概述
        1.2.2 木聚糖酶研究進(jìn)展
        1.2.3 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶研究進(jìn)展
        1.2.4 轉(zhuǎn)錄組研究進(jìn)展
        1.2.5 RACE技術(shù)研究進(jìn)展
        1.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的研究進(jìn)展
    1.3 論文的主要研究內(nèi)容
2 木耳α-af基因全長克隆及生物信息學(xué)分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 供試培養(yǎng)基
        2.1.3 主要儀器和試劑
        2.1.4 引物
        2.1.5 木耳總RNA提取
        2.1.6 RNA完整性和質(zhì)量檢驗(yàn)
        2.1.7 基因篩選
        2.1.8 反轉(zhuǎn)錄RT-PCR得到cDNA
        2.1.9 α-af基因片段的擴(kuò)增
        2.1.10 目的片段膠回收
        2.1.11 目的片段的克隆測序
        2.1.12 5’RACE cDNA和3'RACE cDNA第一鏈合成
        2.1.13 5’RACE
        2.1.14 3 ’RACE
        2.1.15 木耳α-af基因全長克隆
        2.1.16 木耳α-af生物信息學(xué)分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 RNA提取結(jié)果
        2.2.2 基因篩選結(jié)果
        2.2.3 α-af基因片段擴(kuò)增結(jié)果分析
        2.2.4 α-af基因5'RACE結(jié)果分析
        2.2.5 α-af基因3'RACE結(jié)果分析
        2.2.6 木耳α-af基因全長克隆結(jié)果分析
        2.2.7 木耳α-af基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.8 木耳α-af蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.2.9 木耳α-af蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.2.10 木耳α-af基因序列親緣性分析
    2.3 本章小結(jié)
3 木耳α-af基因原核表達(dá)
    3.1 材料和方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 主要儀器和試劑
        3.1.3 引物
        3.1.4 木耳α-af基因擴(kuò)增并轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)DH5α
        3.1.5 pMD18-T-α-af質(zhì)粒提取
        3.1.6 質(zhì)粒雙酶切
        3.1.7 重組載體pET-32a-α-af構(gòu)建
        3.1.8 木耳α-af基因的原核表達(dá)
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 pMD18-T-α-af質(zhì)粒雙酶切檢驗(yàn)
        3.2.2 重組載體pET-32a-α-af雙酶切檢驗(yàn)
        3.2.3 重組載體的SDS-PAGE檢測
    3.3 本章小結(jié)
4 不同碳源對木耳α-af基因相對表達(dá)量的影響
    4.1 材料和方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 供試培養(yǎng)基
        4.1.3 儀器及試劑
        4.1.4 引物
        4.1.5 菌絲RNA提取
        4.1.6 qRT-PCR模板cDNA制作
        4.1.7 qRT-PCR
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 RNA質(zhì)量檢測
        4.2.2 qRT-PCR結(jié)果
    4.3 本章小結(jié)
結(jié)論
研究展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3261841