山葡萄（Vitis amurensis Rupr.）是葡萄屬中最抗寒的一個(gè)種,對(duì)多種歐亞種群易感的病害都有較強(qiáng)的抵抗力。它是目前國(guó)內(nèi)外葡萄抗寒和抗病育種的主要種質(zhì)資源。而野生山葡萄一般為雌雄異株,兩性花類型極為罕見。本研究以山葡萄‘左山一’x‘043’雜交F1代群體為試材,利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)結(jié)合BSA（集群分離分析法）,進(jìn)行與山葡萄性別相關(guān)的定位研究,以實(shí)現(xiàn)山葡萄性別的早期鑒定,加快山葡萄育種進(jìn)程。本研究取得了以下主要結(jié)果:1.應(yīng)用SSR-PCR技術(shù)篩選出兩對(duì)具有父母本特異性條帶的SSR引物,對(duì)117株雜交后代進(jìn)行雜種真實(shí)性鑒定,有108株雜交后代中出現(xiàn)了清晰、穩(wěn)定的親本特異型條帶,結(jié)合田間形態(tài)學(xué)觀察,確定真雜種率為92.3%。2.采用SSR分子標(biāo)記結(jié)合BSA技術(shù)對(duì)山葡萄‘左山一’和‘043’雜交F1代進(jìn)行性別差異基因篩選。首先構(gòu)建雌雄基因池（各20株）,然后用190對(duì)微衛(wèi)星引物對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增,發(fā)現(xiàn)3對(duì)引物（VMC3B10F、Y-2-11B和VMC2C10-1）能在雌性基因池間擴(kuò)增出特異性條帶。用構(gòu)建基因池的40株個(gè)體對(duì)3對(duì)引物進(jìn)行個(gè)體驗(yàn)證,3對(duì)引物在40株個(gè)體上均能擴(kuò)增出條帶,且這... 

【文章來(lái)源】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

山葡萄雄花和雌能花圖

（1）將 117 個(gè)個(gè)體和 2 個(gè)親本共 119 個(gè) DNA 母液用 Thermo Scientific NANODR000C 檢測(cè)，結(jié)果顯示其核酸和蛋白質(zhì)的吸光度（OD260/OD280）比值均在 1.7-1.9 之機(jī)抽取 DNA 樣本的檢測(cè)結(jié)果（表 2），說明提取的 DNA 母液純凈，RNA 消化完他蛋白質(zhì)、多酚類雜質(zhì)較少。（2）用 0.8%瓊脂糖凝膠對(duì) DNA 母液進(jìn)行電泳檢測(cè)，記錄產(chǎn)物檢測(cè)成像結(jié)果（圖 取的各單株 DNA 均為一條清晰完整的亮帶，說明基因組 DNA 母液完整性良好，用于后續(xù)的試驗(yàn)。表 2 部分 DNA 樣本吸光度（OD260/OD280）Table 2 Absorbance of some DNAsamples (OD260/OD280)DNA 母液編號(hào)DNAmother fluid number1 8 24 42 56 96 102濃度（μg/μl）concentration（μg/μl）503.3 421.6 480.4 348.1 497.4 533.0 408.5OD260/OD280 1.87 1.83 1.79 1.86 1.86 1.77 1.84

圖 3 引物 UDV087 在雙親上的多態(tài)性結(jié)果圖注：父本：043；母本：左山一 ；M：markerFig.3 The result of primer UDV087 in the parentsNote: Parent: 043; Parent: Zuo Shanyi; M:marker圖 4 引物 VVIP17B 在雙親上的多態(tài)性結(jié)果圖注：父本：043；母本：左山一 ；M：markerFig.4 The result of some polymorphism SSR primer in the parentsNote: Parent: 043; Parent: Zuo Shanyi; M:marker真假雜種鑒定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]柑橘高密度遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建及落葉性狀的QTL定位[D]. 劉升銳.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]山葡萄高密度分子遺傳圖譜構(gòu)建及抗寒性QTL定位研究[D]. 劉鎮(zhèn)東.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]基于SSR分子標(biāo)記的山葡萄種質(zhì)遺傳多樣性研究與核心種質(zhì)構(gòu)建[D]. 溫景輝.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011

碩士論文
[1]歐亞種葡萄遺傳圖譜構(gòu)建和雄性不育基因及部分性狀相關(guān)QTL的定位[D]. 季晨飛.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]CPPU對(duì)山葡萄（Vitis amurensis Rupr.）雄花性別轉(zhuǎn)換機(jī)理的研究[D]. 焦竹青.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[3]桃豫農(nóng)矮砧1號(hào)離體快繁體系的研究和SSR-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化[D]. 熊明國(guó).河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[4]節(jié)瓜（Benincasa hispida Cogn.chieh-qua How.）性別分化的生理學(xué)研究[D]. 魏秉培.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[5]山葡萄種質(zhì)遺傳多樣性的SSR分析及核心種質(zhì)初步構(gòu)建[D]. 吳子龍.東北林業(yè)大學(xué) 2007
[6]美國(guó)肥皂莢花性別分化細(xì)胞形態(tài)學(xué)及特異蛋白質(zhì)研究[D]. 侯亞南.北京林業(yè)大學(xué) 2005



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