番茄是我國主要種植的蔬菜類經(jīng)濟(jì)作物,解決其落花落果對生產(chǎn)有著重要的實(shí)際意義。脫落的過程包括細(xì)胞膨大分離和程序性死亡PCD（Programmed Cell Death）。細(xì)胞的水分運(yùn)輸和膨壓保持是其膨大的關(guān)鍵。而穩(wěn)定的H₂O₂參與PCD的調(diào)控,并調(diào)控脫落過程中的程序性死亡。而前人報(bào)道不同的水通道蛋白參與細(xì)胞膨大,H₂O₂的運(yùn)輸。因此為弄清水通道蛋白是否參與了脫落過程進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn),找出沉默后顯著延緩脫落的關(guān)鍵水通道蛋白SlPIP1;3,SlPIP1;5以及SlTIP1;1:1.本文通過病毒誘導(dǎo)基因沉默（VIGS）將前期鑒定出的番茄離區(qū)且特異性高度表達(dá)水通道蛋白SlPIP1;3,SlPIP1;5,SlPIP2;4,SlPIP2;5,SlTIP4;1,SlTIP1;1分別沉默,其中沉默SlPIP1;3,SlPIP1;5,SlTIP1;1可顯著延緩脫落。2.由于這些基因表達(dá)模式的相似性,進(jìn)一步進(jìn)行雙基因沉默及三基因的沉默,獲得pTRV2-SlPIP1;3SlPIP1;5雙基因沉默株系以及pTRV2-SlPI... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線

質(zhì)粒 DNAEcoR I 限制性內(nèi)切酶BamH I 限制性內(nèi)切酶滅菌水10xK BufferTotal7μL1μL1μL9μL2μL20μL膠回收La 膠回收試劑盒，對目的條帶進(jìn)行回收，以便于下一步的連接 TRV-AQPs 的構(gòu)建組前期鑒定找出 SlPIP1;3, SlPIP1;5, SlPIP2;4, SlPIP2;5, SlTIP4。于是選取這六個(gè)基因并根據(jù) NCBI 上查詢到的 SlPIP1;2;5, SlTIP4;1, SlTIP1;1 的基因全長，找到其特異性的片段，并酶切位點(diǎn)要在水通道蛋白和煙草脆裂病毒 TRV2 的質(zhì)粒上共有BamHⅠ這兩種限制性內(nèi)切酶來進(jìn)行試驗(yàn)。

圖 3-1VIGS 載體雙酶切驗(yàn)證Figure 3-1 double enzyme digestion verification of VIG大腸桿菌菌液 PCR 的鑒定與酶切后的載體進(jìn)行連接后，轉(zhuǎn)到大腸桿菌中篩選。pTRV2-SlTIP1;1pTRV2-SlPIP1;5pTRV2-SlPIP1;3pTRV2-SlPIP2;4pTRV2-SlPIP2;5

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]VIGS技術(shù)的研究進(jìn)展及其在葫蘆科作物中的應(yīng)用[J]. 劉美,劉莉銘,吳會杰,古勤生.  果樹學(xué)報(bào). 2018(11)
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本文編號：3253848