蘋果在其生長周期中要經(jīng)歷各種逆境脅迫,這對蘋果的產(chǎn)量和質(zhì)量造成了嚴(yán)重影響。鈣依賴蛋白激酶（CDPKs）作為一類重要的鈣感受器,對植物生長發(fā)育及逆境脅迫下胞內(nèi)鈣信號的感知和解碼過程發(fā)揮重要作用。在擬南芥、煙草、水稻等植物中已被報(bào)道鈣依賴蛋白激酶參與調(diào)控植物對生物和非生物脅迫的響應(yīng)過程。本研究克隆并分析湖北海棠（Malus hubehensis）CDPK基因MhCPK1在不同組織及逆境脅迫下的表達(dá)模式,從’紅玉’蘋果（Malus×domestica）克隆了與其高度同源的MdCPM1a基因,分別構(gòu)建了 MdCPK1a-GFP融合表達(dá)載體和植物超表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化本氏煙草（Nicotiana benthamiana）,對其亞細(xì)胞定位和基因的功能進(jìn)行了研究。主要研究結(jié)果如下:1、根據(jù)’金冠’蘋果基因組數(shù)據(jù)庫中已經(jīng)公布的（MDP0000153100）基因序列設(shè)計(jì)全長引物,以湖北海棠葉片RNA反轉(zhuǎn)錄后得到的cDNA為模板,從湖北海棠中克隆了 MhCDPK基因。該基因與MDP0000153100同源性很高,因此命名為MhCPK1。MhCPK1放閱讀框長度為1701bp,編碼566個氨基酸,預(yù)測的分子量大小... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１湖北海棠基因的分離

?１７０１ｂｐ??■??圖２－１湖北海棠基因的分離。??Ｆｉｇ?２－１?Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＭｈＣＰＫｌ?ｃＤＮＡ?ｂｙ?ＰＣＲ?ｆｒｏｍ?Ｍａｌｕｓ?ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ．??１７??Ｉ??

２０１０）。為檢測在湖北海棠組織中的表達(dá)特性，以湖北海棠不同組織為材料，??提取不Ｍ組織總ＲＮＡ，以反轉(zhuǎn)錄后的ｃＤＮＡ為模板，進(jìn)行實(shí)時定量ＰＣＲ擴(kuò)增。結(jié)果??如圖所示（圖２－５），在根、莖、葉、花和果實(shí)中，在根中的表達(dá)水平最低，在莖中的表??達(dá)水平和根中相近，僅為根的１．４倍；在果實(shí)中的表達(dá)量最高，其中幼果期的表達(dá)量??足根的８６倍，成熟期的表達(dá)量是報(bào)的１２２倍；在葉和花中的表達(dá)量分別是根的１５倍??和５．６倍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在不同組織器官中表達(dá)差異較大，在果實(shí)中的表達(dá)??量最高，并ＩＩ在果實(shí)發(fā)育的不冋階段其表達(dá)量也存在差異；這暗示著可能參??２０??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]白菜型冬油菜銅鋅超氧化物歧化酶（Cu/Zn-SOD）基因的克隆及其在低溫條件下的表達(dá)[J]. 曾秀存,劉自剛,史鵬輝,許耀照,孫佳,方彥,楊剛,武軍艷,孔德晶,孫萬倉.  作物學(xué)報(bào). 2014(04)
[2]草莓鈣依賴蛋白激酶基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 王萌,王俊,劉洪,李靜,段可,葉正文,高清華.  西北植物學(xué)報(bào). 2011(05)
[3]低溫脅迫對大葉女貞膜脂過氧化及保護(hù)酶活性的影響[J]. 李彥慧,杜紹華,紀(jì)惠芳,孟朝.  河北林果研究. 2007(01)
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博士論文
[1]蘋果鈣依賴蛋白激酶MdCPK1：分子克隆、表達(dá)、定位及被脫落酸的激活[D]. 鄒克琴.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3218144