利用基因組定點(diǎn)修飾的方法改良作物特性對(duì)于植物育種和基因工程是至關(guān)重要的�；蚪M編輯的方法最先證明在細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中能夠發(fā)揮作用,但最近它們也成功地運(yùn)用在植物基因組修飾中。近幾年,序列特異性核酸酶（Sequence specific nuclease,SSN）得到了快速發(fā)展,其中CRISPR/Cas9（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9）系統(tǒng)由sgRNA（Small guide RNA）與Cas9蛋白兩個(gè)元件組成,因而構(gòu)建表達(dá)單元十分簡(jiǎn)便,在植物基因組編輯中得到了廣泛利用。在動(dòng)物中,CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)基因組編輯效率很高,通過(guò)將大量的sgRNA和Cas9蛋白通過(guò)顯微注射進(jìn)入胚胎單細(xì)胞中,形成大量雙等位基因突變。然而在植物中,通常是利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的愈傷組織的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化方法將CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞中。CRISPR/Cas9通過(guò)T-DNA進(jìn)入傷口細(xì)胞中,并整合到快速分化的細(xì)胞基因組中。CRISPR/Cas9等外源基因的表達(dá)先經(jīng)過(guò)瞬時(shí)較高水... 

【文章來(lái)源】：重慶大學(xué)重慶市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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靶序列識(shí)別的sgRNA的結(jié)構(gòu)和機(jī)制Fig1.1sgRNAstructureandmechanismoftargetrecognition

圖 1.2 CRIPSR/Cas9 作用產(chǎn)生的雙鏈斷裂的不同 DNA 修復(fù)機(jī)制Fig1.2 Double-strand breaks induced by a nuclease at a specific site can be repaired either bynon-homologous end joining (NHEJ) or homologous recombination (HR)1.2.3 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)的應(yīng)用近年來(lái)，在 CRISPR/Cas 系統(tǒng)的免疫機(jī)制及 Cas 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能研究中取得了重大的進(jìn)展，其中由 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)發(fā)展起來(lái)的基因編輯技術(shù)，能在原核和

體后挑取陽(yáng)性菌落送測(cè)序，測(cè)圖3.1 P19m突變位點(diǎn)Fig.3.1 P19m mutant pointC突變?yōu)門(mén)，從而Arg（CGG）TCTCGCTCGAATGGAACGAGTTATGTAGCCACCACTCATGGCTACATAACGATGAGTCTCGCTCAAAGCCTACTCG


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