利用基因組定點修飾的方法改良作物特性對于植物育種和基因工程是至關(guān)重要的�；蚪M編輯的方法最先證明在細(xì)菌和哺乳動物細(xì)胞中能夠發(fā)揮作用,但最近它們也成功地運(yùn)用在植物基因組修飾中。近幾年,序列特異性核酸酶（Sequence specific nuclease,SSN）得到了快速發(fā)展,其中CRISPR/Cas9（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9）系統(tǒng)由sgRNA（Small guide RNA）與Cas9蛋白兩個元件組成,因而構(gòu)建表達(dá)單元十分簡便,在植物基因組編輯中得到了廣泛利用。在動物中,CRISPR/Cas9系統(tǒng)對基因組編輯效率很高,通過將大量的sgRNA和Cas9蛋白通過顯微注射進(jìn)入胚胎單細(xì)胞中,形成大量雙等位基因突變。然而在植物中,通常是利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的愈傷組織的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化方法將CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞中。CRISPR/Cas9通過T-DNA進(jìn)入傷口細(xì)胞中,并整合到快速分化的細(xì)胞基因組中。CRISPR/Cas9等外源基因的表達(dá)先經(jīng)過瞬時較高水... 

【文章來源】：重慶大學(xué)重慶市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

靶序列識別的sgRNA的結(jié)構(gòu)和機(jī)制Fig1.1sgRNAstructureandmechanismoftargetrecognition

圖 1.2 CRIPSR/Cas9 作用產(chǎn)生的雙鏈斷裂的不同 DNA 修復(fù)機(jī)制Fig1.2 Double-strand breaks induced by a nuclease at a specific site can be repaired either bynon-homologous end joining (NHEJ) or homologous recombination (HR)1.2.3 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)的應(yīng)用近年來，在 CRISPR/Cas 系統(tǒng)的免疫機(jī)制及 Cas 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能研究中取得了重大的進(jìn)展，其中由 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)發(fā)展起來的基因編輯技術(shù)，能在原核和

體后挑取陽性菌落送測序，測圖3.1 P19m突變位點Fig.3.1 P19m mutant pointC突變?yōu)門，從而Arg（CGG）TCTCGCTCGAATGGAACGAGTTATGTAGCCACCACTCATGGCTACATAACGATGAGTCTCGCTCAAAGCCTACTCG


本文編號：3212086