發(fā)布時(shí)間：2021-06-02 18:49

　　我國作為柑橘的重要原產(chǎn)地,擁有數(shù)目繁多、品質(zhì)優(yōu)良的地方特色品種。―青甌柑‖是2000年在浙江溫州市甌海區(qū)發(fā)現(xiàn)的普通甌柑的芽變,因成熟時(shí)果皮仍為綠色而得名,是一個(gè)典型的成熟衰老延緩型突變材料。―青甌柑‖的出現(xiàn),為我們研究柑橘果實(shí)的成熟和衰老提供了珍貴的實(shí)驗(yàn)材料。NAC（NAM、ATAF1/2、CUC1/2）轉(zhuǎn)錄因子家族不僅成員眾多,而且廣泛存在于陸生植物中,參與調(diào)控植物生命活動(dòng)中的許多生物學(xué)過程。本實(shí)驗(yàn)以青甌柑為材料,克隆NAC轉(zhuǎn)錄因子家族成員NAC036,運(yùn)用酵母雙雜交系統(tǒng)及雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)篩選互作蛋白,并初步預(yù)測NAC036的功能,探究其與青甌柑表型形成之間的關(guān)系,以期揭示NAC轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控青甌柑果實(shí)成熟及采后衰老的機(jī)制。研究結(jié)果如下:1.以花后210 d的青甌柑果實(shí)黃皮層cDNA為模板,PCR擴(kuò)增NAC036全長及短截ORF片段,構(gòu)建PGBKT7誘餌載體,自激活及毒性測試后發(fā)現(xiàn),各誘餌載體在AH109和Y187型酵母菌株中均不存在自激活活性,但對(duì)兩種菌株都存在不同程度的毒性作用從而影響酵母生長。2.利用Mating法篩選酵母雙雜交文庫,經(jīng)二次營養(yǎng)壓力篩選和測序,NCBI數(shù)據(jù)庫比對(duì)... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

花后210d的甌柑與青甌柑果實(shí)

6圖 1.2 酵母雙雜交模型（Fields and Song 1989）UAS：上游激活序列；X：誘餌蛋白；Y：文庫蛋白Fig1.2 Yeast two-hybrid modelUAS: upstream activation sequences; X: Bait protein; Y: Protein library母雙雜交系統(tǒng)多運(yùn)用于檢測已知功能的蛋白質(zhì)間的相互作用，有目的和針?biāo)芯康幕蜻M(jìn)行功能驗(yàn)證，也可將待檢測蛋白進(jìn)行基因突變和缺失處理雙雜交系統(tǒng)檢測其發(fā)生互作的作用位點(diǎn)。只有對(duì)代謝網(wǎng)絡(luò)的大量基因進(jìn)行步功能預(yù)測后才能進(jìn)行點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的互作研究，但我們常常對(duì)某些代謝網(wǎng)絡(luò)知8]。所以“點(diǎn)對(duì)庫”的篩選，即“誘餌”載體對(duì) cDNA 酵母雙雜交文庫高通重要作用日漸突顯。構(gòu)建功能已知蛋白的 BD 誘餌載體，通過雙雜交 cDN選的方法，獲得與其存在特異性相互作用的未知蛋白對(duì)于揭示生物體代謝

圖 1.3 BIFC 模型圖（Wong et al 2011)VN：熒光蛋白 N 端；VC：熒光蛋白 C 端；X：蛋白 A；Y：蛋白 BFig1.3 The pattern of BIFCVN:N-terminal of vector; VC: C-terminal of vector; X:protein A; Y: protein B1.3 研究目的及內(nèi)容近年來發(fā)現(xiàn)的 NAC 轉(zhuǎn)錄因子是植物特有的最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之 。該家族成員眾多，具有多種生物學(xué)功能，且含有 A、B、C、D、E 五個(gè)亞結(jié)構(gòu)域，其 N 端高度保守，有約 150 個(gè)氨基酸，包含核酸定位信號(hào)和 DNA 結(jié)合域，C 端高度變異，為轉(zhuǎn)錄激活域[61],頻繁出現(xiàn)絲氨酸、脯氨酸、谷氨酸等簡單氨基酸序列。目前關(guān)于 NAC轉(zhuǎn)錄因子家族的研究多集中在模式植物中（如擬南芥、水稻等），在擬南芥中，約有1/5 的 NAC 基因與植株衰老相關(guān)[62]，柑橘與模式植物相比仍存在 定的研究困難，目前，對(duì)于 NAC 轉(zhuǎn)錄因子所涉及的植株生長發(fā)育過程的調(diào)控途徑和組成因子還知之甚少，因此，在柑橘中 NAC 基因的功能有待進(jìn) 步的研究。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]世界柑橘品種改良的進(jìn)展[J]. 鄧秀新.  園藝學(xué)報(bào). 2005(06)
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博士論文
[1]水稻獨(dú)腳金內(nèi)酯相關(guān)基因的圖位克隆與功能分析[D]. 王濤.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012

碩士論文
[1]類受體激酶基因StLRPK1在本氏煙中的晚疫病抗性功能鑒定及其介導(dǎo)的可能信號(hào)途徑分析[D]. 孫春蓮.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]青甌柑PAO基因的克隆及分析[D]. 鄭麗.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]甌柑新品種‘無籽甌柑’功能性成分的研究[D]. 陳相濤.浙江農(nóng)林大學(xué) 2010
[4]利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與番茄RIN互作蛋白的初步研究[D]. 侯政.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3210560