香石竹（Dianthuscaryophyllus）又名康乃馨,是全球銷量最大的花卉之一,花朵還可提煉香精。在育種工作中,無人工處理條件下的香石竹通常不結(jié)實,成為其在雜交育種上的局限。原生質(zhì)體融合育種能夠克服香石竹雜交育種的局限,為香石竹耐高溫、高觀賞性狀育種提供有利途徑。高效的香石竹原生質(zhì)分離、純化及再生體系的建立,將為此育種工作提供基礎(chǔ)。本實驗以香石竹無菌系葉片為主要材料,分析了其原生質(zhì)體分離、純化及再生體系建立等相關(guān)條件。確立了香石竹原生質(zhì)體培養(yǎng)的最佳的酶解方式、酶液組分、濃度水平、酶解時間和純化方式。并對原生質(zhì)體培養(yǎng)方式、激素種類與濃度水平、植株再生體系進行探究。結(jié)果如下:1.香石竹原生質(zhì)體分離:1)滲透壓穩(wěn)定劑:利用質(zhì)壁分離測定香石竹無菌系葉片的滲透壓為0.5mol/L,選用甘露醇溶液作為滲透壓穩(wěn)定劑;2)原生質(zhì)體粒徑大小:通過顯微鏡標尺測量,香石竹原生質(zhì)體粒徑大小在40-70μm之間,選用200目尼龍網(wǎng)進行初步純化;3)采用靜置酶解—界面純化法與低速振蕩—沉降純化法進行原生質(zhì)體分離與純化:靜置酶解—界面純化法,最適條件為0.3%纖維素酶+0.5%離析酶,酶解時間為12h。最高... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１．血球計數(shù)板（“Ｗ”為計數(shù)區(qū)，面積１ｍｍ２，體積Ｏ．ｌｐＬ）??Ｆｉｇ２－１．?Ｔｈｅ?ｈｅｍａｃｙｔｏｍｅｔｅｒ，?“Ｗ?’’?ｉｓ?ｔｈｅ?ｃｏｕｎｔｉｎｇ?ｒｅｇｉｏｎ，?ａｒｅａ?ｌｍｎｉ２，?ｖｏｌｕｍｅ??

?原生質(zhì)體懸浮液混合，室溫靜置５－ｌＯｍｉｎ，取混合液于載玻片上，無活性的死細??胞能吸收酚藏花紅染料而呈紅色（圖２－２），球狀均勻、綠色、葉綠體清晰可見的??細胞即為活力較高的原生質(zhì)體。每個樣品重復(fù)３次，取平均值（王琴等２０１３）。??原生質(zhì)體活力＝綠色的原生質(zhì)體／觀察原生質(zhì)體總數(shù)Ｍ００％??ｉｐ?？?＊?■??圖２－２原生質(zhì)體活性檢測??注：紅色為無活性的原生質(zhì)體，綠色有活性，Ｂａｒ＝５〇ｎｍ。??Ｆｉｇ?２－２?Ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ??Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ?ｒｅｄ?ｉｓ?ｉｎａｃｔｉｖｅ，?ｇｒｅｅｎ?ｉｓ?ａｃｔｉｖｅ，?Ｂａｒ＝５０｜ｉｍ．??２．３結(jié)果與分析??２．３．１香石竹原生質(zhì)體培養(yǎng)材料狀態(tài)的調(diào)整??在含ＡｇＮＯ；的培養(yǎng)基中，植株普遍生長迅速，四周苗平均株高達６．１８ｃｍ?（圖??２－３Ａ），高于對照組的株高４．２５ｃｍ（圖２－３Ａ、圖２－３Ａ，?Ｂａｒ＝ｌｃｍ），葉片增大（圖??２－３Ｃ、圖２－３Ｄ，Ｂａｒ＝ｌｃｍ）。Ｔ－ｔｅｓｔ結(jié)果表明處理組與對照差異不顯著（圖２－４Ｂ、??圖２－４Ｂ）。因而，ＡｇＮ０３的添加對于材料生長量的作用并不顯著，不能達到有??效的作用效果。但處理組玻璃化現(xiàn)象減少

Ａ?ＭＳ＾ＡｇＮ０３?ＭＳ?Ｂ?ＭＳ＋．ＡｇＮ０３?ＭＳ??圖２－４株高與葉片長度比較??注：Ａ．處理組與對照株高方差比較；Ｂ．處理組與對照長度方差比較??Ｆｉｇ２－４?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｐｌａｎｔ?ｈｅｉｇｈｔ?ａｎｄ?ｌｅａｆ?ｌｅｎｇｔｈ??Ｎｏｔｅ：?Ａ．?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｐｌａｎｔ?ｈｅｉｇｈｔ；?Ｂ．??Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｌｅａｆ?ｌｅｎｇｔｈ．??１７??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3090366