辣椒疫霉（Phytophthora capsici）是一類(lèi)重要的病原卵菌,其寄主廣泛,能夠侵染茄科（辣椒,番茄）、豆科（利馬豆,豆角）和大部分瓜類(lèi)等植物并能造成毀滅性的災(zāi)害�，F(xiàn)階段,針對(duì)該病害的防治還缺乏有效的措施,由于辣椒疫霉菌容易變異且病害流行蔓延速度快,生產(chǎn)上使用的一些殺菌劑往往達(dá)不到很好的效果。那么,從辣椒疫霉的致病機(jī)理入手,尋找有效的作用靶標(biāo)對(duì)該防治病害至關(guān)重要。辣椒疫霉為半活體營(yíng)養(yǎng)菌,在活體營(yíng)養(yǎng)階段會(huì)分泌一系列效應(yīng)因子來(lái)調(diào)控植物的免疫防衛(wèi)反應(yīng)從而促進(jìn)其侵染定殖。在種類(lèi)多樣的外泌蛋白物中,一類(lèi)與致病性相關(guān)的細(xì)胞質(zhì)效應(yīng)因子被發(fā)現(xiàn)。該類(lèi)效應(yīng)因子的N端具有RxLR-dEER基序和信號(hào)肽結(jié)構(gòu)域,起著分泌和靶定寄主細(xì)胞內(nèi)蛋白的功能,而其C端是功能活性區(qū),有調(diào)控寄主防衛(wèi)反應(yīng)的作用。明確此類(lèi)效應(yīng)因子的功能和作用機(jī)制有利于揭示疫霉菌致病的分子機(jī)制,并為進(jìn)一步利用抗病基因工程方法開(kāi)發(fā)疫霉病害的防控策略提供科學(xué)依據(jù)。我們通過(guò)辣椒疫霉侵染階段的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)以及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)等對(duì)效應(yīng)因子的功能進(jìn)行分析,篩選得到了一個(gè)能夠引起煙草細(xì)胞死亡的細(xì)胞質(zhì)效應(yīng)因子PcRxLR207和... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
上篇 文獻(xiàn)綜述 植物病原卵菌及其效應(yīng)因子的研究進(jìn)展
    1 植物病原卵菌的生活史及侵染
        1.1 疫霉菌生活史
        1.2 疫霉菌的侵染機(jī)制
    2 疫霉菌侵染的病害
        2.1 辣椒疫霉（phytophthora capsici）病害
        2.2 辣椒疫霉的病害循環(huán)
    3 病原卵菌效應(yīng)因子的分類(lèi)
        3.1 質(zhì)外體效應(yīng)因子（Apoplastic effectors）
        3.2 細(xì)胞質(zhì)效應(yīng)因子（Cytoplasmic effectors）
    4 病原卵菌與植物的協(xié)同進(jìn)化
    展望
下篇 研究?jī)?nèi)容
    第一章 PCRXLR207的功能與作用機(jī)制研究
        1 材料和方法
            1.1 供試菌株、植物的培養(yǎng)及保存條件
            1.2 培養(yǎng)基及配制方法
            1.3 主要試劑
            1.4 辣椒疫霉基因組DNA提�。–TAB-SDS法）
            1.5 擬南芥總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
            1.6 表達(dá)載體的構(gòu)建
            1.7 大腸桿菌感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化方法
            1.8 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化方法
            1.9 PcRxLR207的功能初步鑒定
            1.10 PcRxLR207的亞細(xì)胞定位
            1.11 酵母雙雜交鑒定PcRxLR207的植物靶標(biāo)基因
            1.12 雙分子熒光互補(bǔ)鑒定PcRxLR207的植物靶標(biāo)基因
            1.13 RBPs與Mito tracker的亞細(xì)胞共定位
        2 結(jié)果與分析
            2.1 瞬時(shí)表達(dá)PcRxLR207能引起煙草葉片細(xì)胞死亡
            2.2 PcRxLR207分布在細(xì)胞質(zhì)中
            2.3 利用酵母雙雜交系統(tǒng)釣取PcRxLR207的擬植物靶標(biāo)基因?yàn)镽BPs
            2.4 PcRxLR207和RBPs在酵母雙雜交系統(tǒng)中均無(wú)自激活活性
            2.5 酵母雙雜交系統(tǒng)驗(yàn)證PcRxLR207與RBPs互作
            2.6 雙分子熒光互補(bǔ)系統(tǒng)驗(yàn)證RBPs為PcRxLR207的植物靶標(biāo)基因
            2.7 RBPs在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中都有分布
        3 討論
    第二章 PCRXLR103的功能與作用機(jī)制研究
        1 材料與方法
            1.1 供試菌株、植物及培養(yǎng)條件
            1.2 培養(yǎng)基及配制方法
            1.3 主要試劑
            1.4 擬南芥總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
            1.5 質(zhì)粒提取的方法（堿式抽提法）
            1.6 表達(dá)載體的構(gòu)建
            1.7 大腸桿菌感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化方法
            1.8 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化方法
            1.9 PcRxLR103的毒性測(cè)定
            1.10 PcRxLR103的表達(dá)模式分析
            1.11 擬南芥的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化技術(shù)
            1.12 酵母雙雜交篩選鑒定PcRxLR103的植物靶標(biāo)基因
            1.13 雙分子熒光互補(bǔ)鑒定PcRxLR103的植物靶標(biāo)基因
        2 結(jié)果與分析
            2.1 在本氏煙中表達(dá)PcRxLR103能夠促進(jìn)辣椒疫霉菌的侵染
            2.2 PcRxLR103在侵染階段誘導(dǎo)表達(dá)
            2.3 PcRxLR103能夠在本氏煙葉片中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡
            2.4 PcRxLR103轉(zhuǎn)基因擬南芥的制備
            2.5 酵母雙雜交系統(tǒng)鑒定PcRxLR103的植物靶標(biāo)基因
            2.6 雙分子熒光系統(tǒng)鑒定PcRxLR103的植物靶標(biāo)基因
        3 討論
參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)與創(chuàng)新點(diǎn)
碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3072277