建立了一種原生質(zhì)體制備新方法,通過(guò)研究接種塊數(shù)量和酶解時(shí)間對(duì)香菇（Lentinula edodes）和金針菇（Flammulina filiformis）原生質(zhì)體制備的影響,對(duì)該方法進(jìn)行了優(yōu)化并利用該方法制備了糙皮側(cè)耳（Pleurotus ostreatus）、雙孢蘑菇（Agaricus bisporus）和中國(guó)美味蘑菇（A.sinodeliciosus）原生質(zhì)體。結(jié)果表明:在鋪有玻璃紙的PDA平板（直徑90 mm）上分別接種7個(gè)香菇、金針菇菌絲塊（直徑4 mm）,培養(yǎng)3 d后將帶有菌絲體的玻璃紙轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿中,直接在菌絲上滴加3 mL1.5%（W∶V）溶壁酶溶液,酶解60 min,單個(gè)平板制備的原生質(zhì)體數(shù)量為10⁶～10⁷個(gè)。使用該方法成功地制備了糙皮側(cè)耳、雙孢蘑菇和中國(guó)美味蘑菇原生質(zhì)體。該方法與常用的原生質(zhì)體制備方法相比具有制備時(shí)間短、操作簡(jiǎn)單和不易污染的優(yōu)點(diǎn)。 

【文章來(lái)源】：食用菌學(xué)報(bào). 2020,27(04)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

直接在玻璃紙上對(duì)菌絲進(jìn)行酶解

圖1 直接在玻璃紙上對(duì)菌絲進(jìn)行酶解接種7個(gè)香菇或金針菇菌絲塊(直徑4 mm)于鋪有玻璃紙的PDA平板上,在(25±1) ℃條件下避光培養(yǎng),待菌落的菌絲相互接觸時(shí),無(wú)菌操作用鑷子將帶有菌落的玻璃紙菌絲面朝上放入已加1 mL 0.6 mol·L-1甘露醇溶液的培養(yǎng)皿中,隨后用8～10 mL的0.6 mol·L-1甘露醇溶液潤(rùn)洗菌落2次,去掉多余的液體,在菌絲上滴加3 mL用0.6 mol·L-1甘露醇溶液配制的1.5%(W∶V)溶壁酶溶液(圖1),然后在30 ℃培養(yǎng)箱中酶解,每隔30 min將培養(yǎng)皿置于顯微鏡下觀察菌絲原生質(zhì)體釋放情況并拍照,然后放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)酶解,總計(jì)酶解180 min。酶解結(jié)束后將酶解液分別轉(zhuǎn)移到2個(gè)2 mL的離心管內(nèi),在4 ℃、876 g條件下離心20 min,棄上清液后將沉淀重新懸浮于200 μL 0.6 mol·L-1的甘露醇溶液中制備原生質(zhì)體懸浮液,用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)原生質(zhì)體的數(shù)量,計(jì)算每毫升懸浮液中原生質(zhì)體數(shù)量。

在鋪有玻璃紙的PDA平板上分別接種7個(gè)糙皮側(cè)耳菌株‘新秀1號(hào)’、雙孢蘑菇菌株‘A15’和中國(guó)美味蘑菇菌株‘1705’菌絲塊(直徑4 mm),分別培養(yǎng)3、3、4 d后,直接在玻璃紙上進(jìn)行酶解,酶解時(shí)間為60 min,原生質(zhì)體制備其他步驟參照1.4。2 結(jié)果與分析

【參考文獻(xiàn)】：
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