建立了一種原生質體制備新方法,通過研究接種塊數(shù)量和酶解時間對香菇（Lentinula edodes）和金針菇（Flammulina filiformis）原生質體制備的影響,對該方法進行了優(yōu)化并利用該方法制備了糙皮側耳（Pleurotus ostreatus）、雙孢蘑菇（Agaricus bisporus）和中國美味蘑菇（A.sinodeliciosus）原生質體。結果表明:在鋪有玻璃紙的PDA平板（直徑90 mm）上分別接種7個香菇、金針菇菌絲塊（直徑4 mm）,培養(yǎng)3 d后將帶有菌絲體的玻璃紙轉移到另一個無菌培養(yǎng)皿中,直接在菌絲上滴加3 mL1.5%（W∶V）溶壁酶溶液,酶解60 min,單個平板制備的原生質體數(shù)量為10⁶～10⁷個。使用該方法成功地制備了糙皮側耳、雙孢蘑菇和中國美味蘑菇原生質體。該方法與常用的原生質體制備方法相比具有制備時間短、操作簡單和不易污染的優(yōu)點。 

【文章來源】：食用菌學報. 2020,27(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

直接在玻璃紙上對菌絲進行酶解

圖1 直接在玻璃紙上對菌絲進行酶解接種7個香菇或金針菇菌絲塊(直徑4 mm)于鋪有玻璃紙的PDA平板上,在(25±1) ℃條件下避光培養(yǎng),待菌落的菌絲相互接觸時,無菌操作用鑷子將帶有菌落的玻璃紙菌絲面朝上放入已加1 mL 0.6 mol·L-1甘露醇溶液的培養(yǎng)皿中,隨后用8～10 mL的0.6 mol·L-1甘露醇溶液潤洗菌落2次,去掉多余的液體,在菌絲上滴加3 mL用0.6 mol·L-1甘露醇溶液配制的1.5%(W∶V)溶壁酶溶液(圖1),然后在30 ℃培養(yǎng)箱中酶解,每隔30 min將培養(yǎng)皿置于顯微鏡下觀察菌絲原生質體釋放情況并拍照,然后放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)酶解,總計酶解180 min。酶解結束后將酶解液分別轉移到2個2 mL的離心管內,在4 ℃、876 g條件下離心20 min,棄上清液后將沉淀重新懸浮于200 μL 0.6 mol·L-1的甘露醇溶液中制備原生質體懸浮液,用血球計數(shù)板計數(shù)原生質體的數(shù)量,計算每毫升懸浮液中原生質體數(shù)量。

在鋪有玻璃紙的PDA平板上分別接種7個糙皮側耳菌株‘新秀1號’、雙孢蘑菇菌株‘A15’和中國美味蘑菇菌株‘1705’菌絲塊(直徑4 mm),分別培養(yǎng)3、3、4 d后,直接在玻璃紙上進行酶解,酶解時間為60 min,原生質體制備其他步驟參照1.4。2 結果與分析

【參考文獻】：
期刊論文
[1]食用菌市場發(fā)展中的問題與對策建議[J]. 王隆洋,于延申,王月,任梓銘.  吉林蔬菜. 2018(07)
[2]草菇原生質體制備、再生條件的響應面法優(yōu)化及誘變效應[J]. 王金斌,李文,張俊沛,趙妍,陳建中,祝子坪,唐雪明.  分子植物育種. 2017(10)
[3]采用原生質體單核體雜交技術創(chuàng)新香菇種質資源[J]. 宋瑩,劉俊杰,張敏,劉巖巖,劉娜,李宏亮.  北方園藝. 2017(19)
[4]農桿菌介導香菇菌絲遺傳轉化體系的研究[J]. 姜寧,宋春艷,劉建雨,譚琦,章爐軍,尚曉冬.  菌物學報. 2017(11)
[5]金針菇尿嘧啶營養(yǎng)缺陷型菌株的篩選與分子鑒定[J]. 盧緒志,萬佳寧,茅文俊,楊瑞恒,王瑞娟,鮑大鵬.  園藝學報. 2017(03)
[6]農桿菌介導法轉化金針菇不同受體的效率比較[J]. 劉建雨,徐珍,張丹,王瑞娟,譚琦,尚曉冬.  食用菌學報. 2015(03)
[7]秦巴蛹蟲草原生質體的制備及再生條件研究[J]. 馬躍騰,杜雙田,丁建,紀曉朋,鮑蕊,李珍.  西北農林科技大學學報(自然科學版). 2015(09)
[8]松茸原生質體制備、再生條件優(yōu)化及釋放方式觀察[J]. 張麗,郭成金.  浙江農業(yè)學報. 2014(04)
[9]利用原生質體紫外誘變技術選育耐高溫香菇菌株[J]. 王麗寧,趙妍,張寶粉,陳明杰.  微生物學通報. 2014(07)
[10]毛木耳原生質體制備與再生條件的研究[J]. 孫露,姚方杰,方明.  中國食用菌. 2012(03)



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