MiRNAs是一類內(nèi)源性的小分子RNA,長度大約21-24 nt。MiRNAs通過與靶標互作參與調(diào)控植物的生長發(fā)育、形態(tài)建成、果實發(fā)育、對生物和非生物脅迫的響應(yīng)等。近年來隨著高通量測序和生物信息學(xué)的發(fā)展,越來越多的miRNAs已經(jīng)被鑒定。蘋果是一種重要的經(jīng)濟作物。干旱脅迫會影響蘋果的產(chǎn)量和品質(zhì),因此對其抗旱性的研究具有重要的價值。miRBase-2.1中記錄有206個蘋果特異的pre-miRNA,207個成熟miRNAs,但是與抗旱相關(guān)的miRNAs卻鮮有報道。本研究利用高通量測序分析平邑甜茶和富平楸子兩種蘋果砧木中與抗旱相關(guān)的miRNAs,篩選差異表達的miRNAs進行qRT-PCR鑒定。選擇與抗旱相關(guān)的miRNAs進行過表達和轉(zhuǎn)基因研究,結(jié)果如下:（1）對測序結(jié)果中篩選的14個已知miRNAs和12個新型miRNAs進行qRT-PCR驗證,結(jié)果顯示10個已知miRNAs和10個新型miRNAs的表達量變化趨勢與測序結(jié)果一致。而mdm-MIR7121d-p3和PC-5p-101486₁30的溶解曲線沒有峰值;mdm-miR477b、mdm-miR7122a、md... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

植物miRNAs的合成途徑(OlivierVoinnet2009)

圖 2-1 總 RNA 提取結(jié)果Fig. 2-1 Total RNA extraction resul表 2-5 新型 miRNAsTable 2-5 Novel miRNAsseq lenup/downPv(t_CTTGGACC22 up5.505AACCCTC21 up2.704CCTGCTT21 up1.905CAACAACT24 up5.905CTTGTCC20 up5.204AGGACA21 up7.704

第二章 蘋果 miRNA 的差異表達 型 miRNAs 符合測序結(jié)果，其中 mdm-MIR7121d-p3 和 PC-5p-101486_130 的溶解曲線沒有峰值；mdm-miR477b 、mdm-miR7122a、mdm-miR393a 和 mdm-miR156t 的溶解曲線雖然是單峰，但是定量結(jié)果與測序不符合。2.3.3.1 內(nèi)參的表達分析根據(jù)上述選擇的三個內(nèi)參，設(shè)計引物進過實時定量 PCR，根據(jù)三個內(nèi)參的擴增曲線和溶解曲線（圖 2-2）確定最終的內(nèi)參選擇。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]過表達番茄Sly-miR397基因增強擬南芥的耐旱性[J]. 向娟,林鵬,李興盛,李雙桃,劉夢云,張磊,郭仰東.  中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2016(10)
[2]microRNA表達檢測技術(shù)進展[J]. 張宇,張勇,楊長成,王振寧.  新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2008(06)
[3]Identification and characterization of new plant microRNAs using EST analysis[J]. George P.COBB1,Todd A.ANDERSON.  Cell Research. 2005(05)
[4]水分脅迫對冬小麥CO2同化作用的影響[J]. 薛崧,汪沛洪,許大全,李立人.  植物生理學(xué)報. 1992(01)

碩士論文
[1]玉米紋枯病脅迫響應(yīng)相關(guān)miRNA的功能研究[D]. 韓素芬.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：2918171