芍藥（Paeoniaa lactiflora Pall.）為多年生宿根草本觀賞花卉,也是東北地區(qū)重要的園林綠化植物。但芍藥種子具有典型的上、下胚軸雙重休眠的特性,生長周期長達半年之久,所以在種子繁殖過程中常常因不能打破休眠而造成萌發(fā)率低,嚴重影響其繁種生產(chǎn)。赤霉素（GA）作為植物體內(nèi)最重要的激素,對芍藥種子萌發(fā)和下胚軸伸長有促進作用,使作為赤霉素轉(zhuǎn)錄因子的DELLA蛋白家族基因PlGAl1在芍藥種子萌發(fā)過程中作用突出,而PlGAl1基因啟動子調(diào)控著基因的轉(zhuǎn)錄表達。本研究以芍藥雜交后的子代種子（♀粉玉奴×♂粉玉樓）為材料,在已獲得的與芍藥休眠萌發(fā)相關(guān)的DELLA蛋白PlGAl1基因的cDNA 1872 bp全長序列的基礎(chǔ)上,利用染色體步移技術(shù),成功克隆出芍藥DELLA蛋白PlGAl1基因861 bp的啟動子序列。主要的實驗結(jié)果如下:1.芍藥不同組織所提取DNA的質(zhì)量有所不同,用Nanodrop 2000微量分光光度計對所獲得的基因組DNA進行濃度、產(chǎn)量及PCR擴增檢測,結(jié)果表明,從7種組織獲得的基因組DNA中,種子、組培苗葉片、成熟葉片的OD260/OD280值在1.80-1.90之間,... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1.1 高等植物啟動子研究進展
        1.1.1 植物啟動子基本特征
        1.1.2 植物啟動子類型
        1.1.3 植物啟動子的克隆方法
    1.2 植物種子特異性啟動子的研究進展
    1.3 DELLA蛋白基因啟動子的研究進展
    1.4 本研究的目的與意義
    1.5 本研究的技術(shù)路線
第二章 DELLA蛋白PlGAl1基因啟動子的克隆及序列預(yù)測
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株與克隆載體
        2.1.3 試驗試劑
        2.1.4 常用試劑及培養(yǎng)基的配制方法
        2.1.5 主要試驗儀器及生物分析軟件
    2.2 試驗方法
        2.2.1 芍藥基因組DNA的提取
        2.2.2 芍藥不同組織基因組DNA提取質(zhì)量的比較
        2.2.3 染色體步移擴增DELLA蛋白PlGAl1基因啟動子序列
        2.2.4 DELLA蛋白PlGAl1基因5'調(diào)控區(qū)序列的測定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 芍藥不同組織基因組DNA提取質(zhì)量比較
        2.3.2 染色體步移擴增DELLA蛋白PlGAl1基因啟動子序列
        2.3.3 DELLA蛋白PlGAl1基因啟動子序列分析及功能預(yù)測
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 DELLA蛋白PlGAl1基因表達載體構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
    3.1 試驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株與克隆載體
        3.1.3 試驗試劑
        3.1.4 常用培養(yǎng)基的配制方法
        3.1.5 主要試驗儀器
        3.1.6 常用生物軟件
    3.2 試驗方法
        3.2.1 DELLA蛋白PlGAl1基因啟動子片段的獲得
        3.2.2 融合表達載體的構(gòu)建
        3.2.3 重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 DELLA蛋白PlGAl1基因啟動子片段的獲得
        3.3.2 啟動子片段和表達載體pCAMBIA1301的酶切處理結(jié)果
        3.3.3 重組表達載體的構(gòu)建及檢測
        3.3.4 重組農(nóng)桿菌的鑒定
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]啟動子的類型及應(yīng)用[J]. 賀飛燕,閆建俊,白云鳳,馮瑞云,施俊鳳.  山西農(nóng)業(yè)科學. 2017(01)
[2]甘藍AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子的克隆和生物信息學分析[J]. 郭慧,金司陽,劉寒,王振月.  中國藥師. 2017(01)
[3]小麥查爾酮合成酶基因及其啟動子序列的克隆與分析[J]. 薛保國,謝麗華,楊麗榮,孫潤紅,全鑫,楊艷艷,孫虎,雷振生,趙獻林.  植物病理學報. 2017(01)
[4]芍藥基因組DNA不同提取方法的比較及PCR驗證[J]. 王小國.  現(xiàn)代園藝. 2016(18)
[5]不同方法對甜菜不同組織中總DNA的提取效果[J]. 王希,陳麗,趙春雷,丁廣洲,賈海倫,徐杰.  中國糖料. 2016(04)
[6]梨休眠DELLA蛋白PpGAI基因的克隆與表達分析[J]. 劉杭,楊賀忠,李亮,王芳,吳少華,李永裕.  分子植物育種. 2016(08)
[7]植物miRNA啟動子研究進展[J]. 陳敏,陳慧,包海,黃鵬,王延偉.  中國生物工程雜志. 2016(05)
[8]植物組織特異性啟動子及相關(guān)順式作用元件研究進展[J]. 李濯雪,陳信波.  生物學雜志. 2015(06)
[9]植物啟動子研究進展[J]. 雒雅婧,李杰,張爽,杜克久.  北方園藝. 2015(22)
[10]植物誘導(dǎo)型啟動子及相關(guān)順式作用元件研究進展[J]. 李濯雪,陳信波.  生物技術(shù)通報. 2015(10)

博士論文
[1]桃PpERS1、PpADC基因克隆、鑒定及PtADC轉(zhuǎn)基因功能分析[D]. 王保全.華中農(nóng)業(yè)大學 2012

碩士論文
[1]芍藥種子下胚軸休眠與萌發(fā)相關(guān)調(diào)控基因PlGAI1的克隆及功能分析[D]. 崔金秋.沈陽農(nóng)業(yè)大學 2016
[2]岷江百合GPAT基因啟動子的克隆與功能初步分析[D]. 湯灣.沈陽農(nóng)業(yè)大學 2016
[3]芍藥種子中α-亞麻酸生物合成相關(guān)基因的克隆與表達[D]. 姜瑤.揚州大學 2015
[4]葡萄βVPE基因啟動子的克隆與功能分析[D]. 魏蓉.西北農(nóng)林科技大學 2014
[5]強冬性小麥重結(jié)晶抑制蛋白基因啟動子的分離與鑒定[D]. 姜躍.沈陽農(nóng)業(yè)大學 2013
[6]亞洲棉種皮特異性啟動子的克隆及表達載體構(gòu)建[D]. 余道乾.中國農(nóng)業(yè)科學院 2013
[7]銀杏MECT、MECPs基因啟動子克隆及植物表達載體構(gòu)建[D]. 袁紅慧.武漢工程大學 2013
[8]西瓜1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸合成酶基因及啟動子的克隆與分析[D]. 李萌.河北農(nóng)業(yè)大學 2012
[9]枇杷（Eriobotrya japonica Lindl.）DELLA基因的克隆與分析[D]. 楊敏.西南大學 2011
[10]桃PG酶基因啟動子克隆及序列分析[D]. 郭國寧.河南科技大學 2010



本文編號：2917481