本文以‘章姬’和‘紅顏’兩個貴州主栽草莓品種為材料,對離體快繁技術(shù)、離體材料遺傳變異的ISSR及DNA甲基化檢測等方面進(jìn)行研究,旨在從遺傳和表觀遺傳視角窺視遺傳變異情況,為組培快繁生產(chǎn)草莓種苗提供決策依據(jù)。1.優(yōu)化了2個貴州主栽草莓品種的離體快繁技術(shù)體系采用‘章姬’和‘紅顏’2個品種草莓的匍匐莖段為外植體,經(jīng)過清水清洗和0.1%升汞溶液消毒5~6 min,接種在MS+0.5 mg/L BA+0.2 mg/L IBA+30.0 g蔗糖+7.0 g瓊脂,誘導(dǎo)萌發(fā)�！录А汀t顏’草莓的最佳增殖培養(yǎng)基為:MS+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂,pH(5.8~6.0),‘章姬’的增殖系數(shù)為4.9,‘紅顏’的增殖系數(shù)為1.9;‘章姬’的生根培養(yǎng)以1/2MS+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂最好,生根率均達(dá)90%以上,而‘紅顏’的最優(yōu)生根基培養(yǎng)基為1/2MS+0.2 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂,生根率均達(dá)100%。二者在煉苗10 d后移栽至無菌基質(zhì)中,其成活率達(dá)87%。2.試管苗遺傳穩(wěn)定性的ISSR檢測選取長勢一致的‘紅顏’組培苗,檢測繼代次數(shù)(第0、5、7、9、10、12)的遺傳變異情況。以‘章姬’組培苗為材料,檢測繼代次數(shù)(第0、5、7、9、10、12、14、18)的遺傳變異情況。第0~12代由于材料限制,每代隨機(jī)選取3株,第14代和18代每代隨機(jī)選取20株,進(jìn)行ISSR檢測。結(jié)果表明,采用49個ISSR引物‘紅顏’擴(kuò)增出207個標(biāo)記,‘章姬’擴(kuò)增出214個標(biāo)記。在引物檢測范圍內(nèi),所有條帶均為單態(tài)帶,因此在組培快繁過程中組培苗中沒有檢測到遺傳變異。3.試管苗DNA甲基化的MSAP檢測‘紅顏’篩選出擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性高和穩(wěn)定性好的19對引物,‘章姬’篩選出21對引物,采用這些引物對組培苗和田間植株進(jìn)行DNA甲基化檢測。結(jié)果表明,‘紅顏’在繼代5、7、9、10、11、12次后,19對引物共檢測出個2,189基因位點,總甲基化率分別為11.3%、8.4%、8.0%、9.5%、10.5%和9.3%;‘章姬’在繼代5、7、9、10、11、12次后,21對引物共檢測出2,522個基因位點,總甲基化率分別為10.5%、7.5%、7.1%、8.3%、8.4%和8.3%,因此DNA甲基化隨繼代次數(shù)的增加,組培苗的甲基化敏感多態(tài)性整體呈現(xiàn)出下降趨勢。而組培苗植株在移栽后1、2、3月檢測中,組培苗DNA甲基化水平又逐漸升高,且兩個品種的DNA甲基化變異程度大致相同。4.冷馴化時DNA甲基化的MSAP檢測以‘章姬’組培苗為材料,采用14對選擇性引物在冷馴化(4℃)過程中共檢測出2,499個基因位點,處理0 d、1 d、3 d、5 d、7 d和10 d,基因組MSAP比率分別為27.2%、20.7%、25.8%、22.7%、22.7%和22.4%,DNA總甲基化水平整體呈下降趨勢,恢復(fù)5 d后MSAP比率上升為26.05%。在DNA甲基化模式變化方面,以去甲基化現(xiàn)象為主,同時伴有甲基化現(xiàn)象發(fā)生�；厥铡⒖寺〔y序某些草莓基因組的甲基化修飾位點,分離得到5條存在甲基化修飾的基因組DNA序列。BLAST比對分析表明,在這些序列中都存在明顯的“CCGG”二核苷酸成簇富集現(xiàn)象,與MSAP結(jié)果一致。
【學(xué)位單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S668.4
【部分圖文】：

圖 3.2 草莓組培苗部分 ISSR 引物篩選的瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果注：M 為 D2000，M03-834 為 ISSR 引物編號。圖 3.3 不同繼代次數(shù)‘紅顏’組培苗的遺傳變異 ISSR 檢測(引物 811)注：M 是 D2000，0、5、7、9、10、12 代表繼代次數(shù)，a-c 代表選取的植株編號。

貴州大學(xué)碩士畢業(yè)論文圖 3.2 草莓組培苗部分 ISSR 引物篩選的瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果注：M 為 D2000，M03-834 為 ISSR 引物編號。

- 34 -圖 3.4 不同繼代次數(shù)‘章姬’組培苗的遺傳變異 ISSR 檢測(引物 M08)注：M 是 D2000，0、5、7、9、10、12、14、18 代表繼代次數(shù)，a-t 代表選取的植株編號。圖 3.5 6%聚丙烯酰胺凝膠電泳 ISSR 檢測‘章姬’組培苗的遺傳變異(引物 851、811)注：M 是 D2000，0、5、7、9、10、12 代表繼代次數(shù)，a-d 代表選取的植株編號。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2876362