雙孢蘑菇擔(dān)子及擔(dān)孢子的微觀形態(tài)學(xué)的研究有助于了解雙孢蘑菇重要器官的發(fā)育過程和特征,為遺傳育種提供依據(jù)。本研究綜合利用光學(xué)顯微鏡、共聚焦顯微鏡和掃描電子顯微鏡等顯微技術(shù)研究雙孢蘑菇擔(dān)子、擔(dān)孢子在不同發(fā)育階段的微觀形態(tài)特征。結(jié)果顯示:雙孢蘑菇菌絲體具有多態(tài)性,根據(jù)菌絲形態(tài)可分為基內(nèi)匍匐菌絲、基外氣生菌絲、基外刺狀氣生菌絲、螺旋狀狀氣生菌絲;擔(dān)子呈近圓柱體緊密簇狀生長,且發(fā)育早期(孢子梗形成前)的擔(dān)子頂部覆蓋有膜狀物(即擔(dān)子頂膜),并首次發(fā)現(xiàn)不同發(fā)育時期的不同類型擔(dān)子比例存在變化,即內(nèi)菌幕出現(xiàn)期的3孢擔(dān)子比例高于成熟期。擔(dān)子核相變化觀察表明,擔(dān)子發(fā)育過程中兩個細胞核在擔(dān)子中部融合,融合的單細胞核向擔(dān)子頂部遷移并發(fā)生減數(shù)分裂,最終在擔(dān)子頂部形成4個單倍體核,減數(shù)第二次分裂有時存在不同步性,此時擔(dān)子頭部出現(xiàn)3核現(xiàn)象,減數(shù)分裂后的4個單倍體核最終平均地遷移入擔(dān)孢子中,而后兩個核在孢子中發(fā)生有絲分裂,最終每個擔(dān)孢子包含4個核。擔(dān)孢子的透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),擔(dān)孢子壁為兩層,擔(dān)孢子內(nèi)呈現(xiàn)大小不均的脂滴狀物質(zhì)。雜交育種是目前主要的育種方式,由于雙孢蘑菇同核體與異核體菌落形態(tài)難以區(qū)分,需要借助分子標記進行區(qū)分。本研究依據(jù)雙孢蘑菇擔(dān)子掃描電鏡的觀察結(jié)果,選取發(fā)育早期(內(nèi)菌幕出現(xiàn)期)的雙孢蘑菇子實體收集擔(dān)孢子(以便提高同核體擔(dān)孢子獲得率),通過菌絲形態(tài)、生長速度以及出菇等試驗篩選獲得42株核型明確的單孢菌株,并以42株單孢菌株基因組為模板,篩選InDel分子標記,最終得到12對能準確區(qū)分雙孢蘑菇同核體的分子標記。真菌RLM基因是MADS家族的轉(zhuǎn)錄因子,被證實受非生物脅迫調(diào)控,參與調(diào)節(jié)碳水化合物進入細胞壁的生物合成途徑,而AbRLM基因在雙孢蘑菇發(fā)育過程中的表達情況尚未被研究。本研究使用RT-qPCR技術(shù)對8個雙孢蘑菇內(nèi)參基因在5個發(fā)育時期、3種不同組織器官和4個不同溫度條件下的表達情況進檢測,使用ΔCt法、GeNorm和NormFiner分析單基因、雙基因組合和三基因組合的表達差異情況進行穩(wěn)定性分析,而后以最穩(wěn)定表達的基因組合為內(nèi)參基因分析AbRLM基因在不同發(fā)育時期、不同子實體組織不同溫度培養(yǎng)菌絲中的差異表達情況。結(jié)果表明:40s*Actin*Eif5基因組合可作為雙孢蘑菇不同發(fā)育時期樣本的穩(wěn)定表達的內(nèi)參基因,Eif5*Ubiquitin*PRL14基因組合是最適合在不同組織中樣品中作為內(nèi)參基因;EF1*Ubiquitin*RPL14基因組合可在不同溫度處理菌絲樣品中可作為最佳內(nèi)參基因。AbRLM基因在原基分化期、15℃培養(yǎng)菌絲及菌褶中明顯高表達,說明AbRLM基因與原基形成和分化、擔(dān)子發(fā)育密切相關(guān)。
【學(xué)位單位】：浙江師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S646.11
【部分圖文】：

圖 2.1 雙孢蘑菇發(fā)育過程中 6 個不同發(fā)育時期Fig. 2.1 six different stages of agaricus bisporus development2.1.3 擔(dān)子和擔(dān)孢子內(nèi)部結(jié)構(gòu)觀察樣品前處理方法參見 Liu（2010）[91]，步驟包括：1、取樣，收集雙孢蘑菇擔(dān)孢

菌絲形態(tài)

圖 2.3 雙孢蘑菇菌絲掃描電子顯微鏡圖片g. 2.3 scanning electron microscope images of agaricus bisporu擔(dān)孢子形態(tài)結(jié)構(gòu)
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本文編號：2843426