梨黑斑病是由鏈格孢屬(Alternaria)真菌所致,在我國(guó)梨主產(chǎn)區(qū)發(fā)生和危害十分嚴(yán)重。但目前我國(guó)尚缺乏對(duì)該病病原菌種類的系統(tǒng)鑒定,也未見從梨黑斑病病原菌分離出真菌病毒的報(bào)道。本研究從我國(guó)梨主產(chǎn)區(qū)大量采集黑斑病病樣,進(jìn)行病原真菌分離和形態(tài)與分子鑒定及致病性測(cè)定,并從SCFS-3菌株中分離到一種新的真菌病毒,主要研究結(jié)果如下:從我國(guó)重慶、江西、安徽、湖北、四川、甘肅、浙江、吉林和山東共9省市采集梨黑斑病病樣,分離得到300個(gè)鏈格孢菌株。形態(tài)觀察結(jié)果顯示,這些菌株的分生孢子鏈長(zhǎng)度及分支數(shù)有異,可分為四種類型,所占比例分別為類型Ⅰ72.6%、類型Ⅱ16.7%、類型Ⅲ6%,類型Ⅳ4.7%。分子鑒定結(jié)果顯示,rDNA-ITS與GAPDH基因很難鑒定到種,CAD和Alta基因可鑒定出A.gaisen與A.longpies,對(duì)128個(gè)菌株的ATPase基因鑒定,其中56個(gè)菌株鑒定出6個(gè)種,分別為A.malvae(2個(gè)菌株)、A.longpies(3個(gè)菌株)、A.citrimacularis(18個(gè)菌株)、A.tenuissima(8個(gè)菌株)、A.herbiphorbicola(4個(gè)菌株)、A.dumosa個(gè)(18個(gè)菌株),其余72個(gè)菌株很難鑒定到種,其中,A.malvae、A.longpies、A.citrimacularis、A.herbiphorbicola和A.dumosa首次在梨樹黑斑病樣品上分離得到。215個(gè)菌株接種于豐水梨離體葉片,結(jié)果顯示菌株間存在明顯差異,強(qiáng)致病菌株占48%、中等致病菌株22%、弱致病菌株30%。從來源于四川成都的SCFS-3菌株中分離到一種新的dsRNA病毒,可能為Botybirnaviridae的一個(gè)新成員,暫命名為Alternaria botybirnavirus 1(ABRV1)。進(jìn)化分析結(jié)果表明,ABRV1與已報(bào)道的SsBRV1和BpRV1親緣關(guān)系最近。ABRV1可通過分生孢子垂直傳播,后代菌株帶毒率達(dá)94%。ABRV1可經(jīng)水平傳播到SCFS-50菌株中,使其致病力顯著下降。經(jīng)電鏡觀察,ABRV1的病毒粒子呈球形,直徑為40 nm。病毒粒子裂解出的和從菌絲中提取到的dsRNA1、dsRNA2的大小一致。SDS-PAGE電泳表明,從病毒粒子可檢測(cè)到三條結(jié)構(gòu)蛋白條帶,其大小分別為,80KDa(P80)、70KDa(P70)和60KDa(P60),P80與P70均由ORF2編碼,P60由ORF1編碼。
【學(xué)位單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：S436.612.14
【部分圖文】：

圖 2.1 梨黑斑病在果園中原始癥狀圖Fig. 2.1 The original symptoms of the pear black spot in the fildA，梨黑斑病侵染幼嫩葉片癥狀；B-C，病斑逐漸擴(kuò)大呈圓形或者不規(guī)則病斑；D，梨黑斑病侵染果.2 病原菌分離純化及其形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果從我國(guó)重慶、江西、安徽、湖北、四川、甘肅、浙江、吉林、山東地區(qū)分離得到鏈格孢菌株共計(jì) 300 個(gè)，在所分離得到的分離物中 42 個(gè)青霉，23 個(gè)灰葡萄孢，42 個(gè)炭疽以及 42 個(gè)鐮刀菌不在本研究范圍內(nèi)。從各得到的黑斑病菌株在 PDA 培養(yǎng)基上，均可以產(chǎn)生氣生菌絲。且在培養(yǎng)后生黑色素（圖 2.2）。

圖 2.1 梨黑斑病在果園中原始癥狀圖1 The original symptoms of the pear black spot in th嫩葉片癥狀；B-C，病斑逐漸擴(kuò)大呈圓形或者不規(guī)則病斑；D，梨黑離純化及其形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果江西、安徽、湖北、四川、甘肅、浙江、吉林、山孢菌株共計(jì) 300 個(gè)，在所分離得到的分離物中 42萄孢，42 個(gè)炭疽以及 42 個(gè)鐮刀菌不在本研究范圍內(nèi)菌株在 PDA 培養(yǎng)基上，均可以產(chǎn)生氣生菌絲。且在 2.2）。B C D

第二類在 WA 上培養(yǎng)極易產(chǎn)孢，形成 3-20 個(gè)孢子左右的主鏈（圖 2.3- II），分枝或主鏈上形成 1-2 個(gè)側(cè)鏈，側(cè)鏈一般較短（1-5 個(gè)分生孢子），分生孢子梗者彎曲，多數(shù)不分枝（表 2.2）。分生孢子倒棒狀或者長(zhǎng)橢圓形，成熟分生孢子 3-7 個(gè)橫隔膜，1-4 個(gè)縱隔膜，分生孢子長(zhǎng)度范圍為 16.67-27.28 μm，寬度范圍.24-11.25 μm，平均長(zhǎng)寬比為 2.52（表 2.3）。234 個(gè)菌株中共 39 個(gè)菌株產(chǎn)孢表Ⅱ型。第三類在 WA 上培養(yǎng)易產(chǎn)孢，形成短分支的孢子鏈，因假喙可多次產(chǎn)孢，呈軸式延伸（圖 2.3- III）。分生孢子長(zhǎng)度范圍為 19.92-25.86 μm,寬度范圍為 9.17-12.m，平均長(zhǎng)寬比為 2.07（表 2.3）。234 個(gè)菌株中共 14 個(gè)菌株產(chǎn)孢表型為Ⅲ型。四類在 WA 上培養(yǎng)不易產(chǎn)孢，培養(yǎng) 20 d 之后，也很難產(chǎn)生分生孢子，故未統(tǒng)計(jì)生孢子大小。其中第一類產(chǎn)孢表型所占比例為 72.6%，第二種產(chǎn)孢表型所占比 16.7%，第三種產(chǎn)孢表型所占比例為 6%，第四種產(chǎn)孢表型所占比例為 4.7%（.2）。234 個(gè)菌株中共 14 個(gè)菌株產(chǎn)孢表型為Ⅳ型ⅠⅡ Ⅲ
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2837449