核桃(Juglans regia L.)具有無(wú)融合生殖能力,利用無(wú)融合胚建立核桃的離體再生體系,這在栽培和育種上均具有很重要的理論和實(shí)踐意義。本論文觀(guān)察了不同核桃品種(系)的無(wú)融合生殖率,研究了適宜的外植體滅菌方法和控制褐化的方法,篩選了誘導(dǎo)核桃胚萌發(fā)以及核桃莖段培養(yǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。主要結(jié)果如下:1.不同核桃品種(系)的無(wú)融合生殖能力調(diào)查。采用套袋隔離,觀(guān)察了5個(gè)供試核桃品種(系)的無(wú)融合生殖能力。結(jié)果表明,供試材料均具有無(wú)融合生殖能力,平均無(wú)融合生殖率為52.47%。其中,‘香玲’的無(wú)融合生殖率為54.67%,‘元林’為52.33%,‘瑞嘉’為56.67%,‘瑞秀’為49.67%,‘Y17’為49.00%,方差分析顯示各品種間無(wú)融合生殖能力差異顯著。2.核桃離體胚萌發(fā)成苗的最佳培養(yǎng)基組合是DKW+6-BA 2.0mg·L~(-1)+PVP200mg·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1)+瓊脂7g·L~(-1)。最佳滅菌條件及培養(yǎng)基的選擇。外植體材料為5個(gè)供試品種的無(wú)融合生殖胚,核桃胚在70%酒精消毒30s,0.1%升汞表面消毒5min的情況下滅菌效果最好,污染率僅為1.11%。核桃胚在MS、DKW、1/2MS、WPM等4個(gè)基本培養(yǎng)基中的萌發(fā)率差異顯著,在DKW中的萌發(fā)率最高為73.50%。培養(yǎng)基中添加蔗糖濃度為30g·L~(-1)時(shí),核桃胚萌發(fā)率最高為72.39%,不同濃度蔗糖的基本培養(yǎng)基誘導(dǎo)核桃胚萌發(fā)的差異顯著。培養(yǎng)基的pH值在5.8時(shí),核桃胚的萌發(fā)率最高為73.04%,不同pH值的基本培養(yǎng)基誘導(dǎo)核桃胚萌發(fā)的差異顯著。最佳取材時(shí)間的確定及不同品種(系)的萌發(fā)成苗率。取材時(shí)間在7月15號(hào)左右的核桃種胚萌發(fā)成苗率很高,為78.10%,核桃幼胚的萌發(fā)成苗率比成熟的核桃胚萌發(fā)成苗率高,不同的取材時(shí)間萌發(fā)成苗率差異顯著。核桃的5個(gè)品種中,‘Y17’的萌發(fā)成苗率最高為79.29%,5個(gè)品種之間的萌發(fā)成苗率差異顯著。培養(yǎng)條件的優(yōu)化包括溫度、濕度、光照強(qiáng)度的篩選。當(dāng)培養(yǎng)箱溫度為26℃,核桃胚萌發(fā)成苗率最高為71.35%,相對(duì)濕度為40%,核桃胚的萌發(fā)率最高為71.37%,光強(qiáng)3000lx時(shí),核桃胚的萌發(fā)率最高為71.33%,且不同的溫度條件之間,濕度條件之間、光照強(qiáng)度之間的差異性顯著。PVP的濃度為200mg·L~(-1),核桃胚的褐化率為2.26%,不同濃度的PVP對(duì)核桃胚褐化率影響差異性顯著。且轉(zhuǎn)接時(shí)間隔4天時(shí)可以降低核桃胚的褐化率。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的篩選。在核桃胚離體萌發(fā)的培養(yǎng)中,不同的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)核桃胚的萌發(fā)成苗影響表現(xiàn)為當(dāng)6-BA的濃度為2.0mg·L~(-1)時(shí),核桃胚的萌發(fā)成苗率最高為73.58%。當(dāng)KT的濃度為1.0mg·L~(-1)時(shí),核桃胚的萌發(fā)成苗率最高為70.46%。當(dāng)2,4-D濃度為2.0mg·L~(-1)時(shí),核桃胚的萌發(fā)成苗率最高為60.68%。不同濃度的6-BA、KT、2,4-D之間影響核桃胚萌發(fā)成苗差異顯著,以6-BA的誘導(dǎo)效果最好。Picloram可以誘導(dǎo)核桃胚產(chǎn)生不定芽,且當(dāng)Picloram的濃度為0.01mg·L~(-1)時(shí),產(chǎn)生的不定芽數(shù)最多,不定芽長(zhǎng)勢(shì)最好,不同濃度的Picloram對(duì)核桃胚不定芽的誘導(dǎo)差異性顯著。不同濃度的IBA對(duì)核桃胚萌發(fā)成苗影響差異不顯著,且誘導(dǎo)率極低。3.核桃莖段不定芽萌發(fā)分化的最佳培養(yǎng)基組合是DKW+6-BA1.5mg·L~(-1)+IBA0.01mg·L~(-1)+PVP 300mg·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1)+瓊脂7g·L~(-1)。在核桃的莖段培養(yǎng)中,植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑6-BA1.5mg·L~(-1)和IBA0.01mg·L~(-1)的組合,KT1.0mg·L~(-1)和IBA0.01mg·L~(-1)的組合,核桃莖段的增殖芽數(shù)多,長(zhǎng)勢(shì)好,且前者強(qiáng)于后者,后者誘導(dǎo)莖段長(zhǎng)出許多無(wú)效的愈傷組織。PVP的濃度為300mg·L~(-1)時(shí)可以將核桃莖段的褐化率降低到9.79%。核桃莖段的品種不同,誘導(dǎo)增殖芽數(shù)也不同,5個(gè)品種中,‘Y17’增殖倍數(shù)最大為3.63。
【學(xué)位單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類(lèi)】：S664.1
【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 核桃無(wú)融合生殖的研究
    1.2 核桃組織培養(yǎng)的研究
        1.2.1 用于核桃組織培養(yǎng)的外植體選擇
        1.2.2 用于核桃組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基選擇
        1.2.3 用于核桃組織培養(yǎng)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑選擇
        1.2.4 消毒滅菌方式的選擇
        1.2.5 影響核桃組織培養(yǎng)的其他因素
    1.3 本研究的目的和意義
    1.4 研究的技術(shù)路線(xiàn)
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)地點(diǎn)概況
    2.2 試驗(yàn)材料
        2.2.1 核桃的無(wú)融合生殖研究材料
        2.2.2 核桃的胚培養(yǎng)研究材料
        2.2.3 核桃莖段培養(yǎng)研究材料
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 核桃無(wú)融合生殖能力的調(diào)查
        2.3.2 不同消毒方式對(duì)核桃種胚污染的影響
        2.3.3 核桃胚培養(yǎng)基本培養(yǎng)基的確定
        2.3.4 培養(yǎng)基pH值對(duì)核桃胚萌發(fā)的影響
        2.3.5 不同的蔗糖濃度對(duì)核桃胚萌發(fā)的影響
        2.3.6 培養(yǎng)條件對(duì)核桃胚萌發(fā)的影響
        2.3.7 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)核桃胚萌發(fā)成苗的影響
        2.3.8 核桃胚萌發(fā)褐化問(wèn)題的研究
        2.3.9 不同取材時(shí)間對(duì)核桃胚萌發(fā)成苗的影響
        2.3.10 不同品種的核桃胚萌發(fā)成苗的比較
        2.3.11 PVP對(duì)核桃莖段培養(yǎng)褐化問(wèn)題的研究
        2.3.12 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比對(duì)核桃莖段培養(yǎng)的影響
        2.3.13 不同品種的核桃莖段培養(yǎng)的比較
    2.4 數(shù)據(jù)處理
3 結(jié)果與分析
    3.1 不同品種核桃的無(wú)融合生殖能力
    3.2 最佳消毒方式的確定
    3.3 最佳基本培養(yǎng)基的確定
    3.4 培養(yǎng)基最佳pH值的確定
    3.5 最佳蔗糖濃度的確定
    3.6 最佳培養(yǎng)條件的確定
        3.6.1 最適宜溫度條件的確定
        3.6.2 最佳濕度條件的確定
        3.6.3 最佳光照強(qiáng)度的確定
    3.7 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑最佳濃度的確定
        3.7.1 最佳 6-BA濃度的確定
        3.7.2 最佳KT濃度的確定
        3.7.3 最佳 2,4-D濃度的確定
        3.7.4 最佳picloram濃度的確定
        3.7.5 最佳IBA濃度的確定
    3.8 核桃胚培養(yǎng)過(guò)程中褐化的控制
        3.8.1 不同轉(zhuǎn)接時(shí)間對(duì)核桃胚萌發(fā)褐化率的影響
        3.8.2 PVP對(duì)核桃胚萌發(fā)褐化率的影響分析
    3.9 不同取材時(shí)間對(duì)核桃胚萌發(fā)成苗的影響
    3.10 不同品種的核桃胚萌發(fā)成苗率的比較
    3.11 PVP對(duì)核桃莖段培養(yǎng)褐化問(wèn)題的研究分析
    3.12 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比對(duì)核桃莖段培養(yǎng)的影響
        3.12.1 不同濃度的 6-BA和IBA對(duì)核桃莖段不定芽分化的影響
        3.12.2 不同濃度的KT和IBA對(duì)核桃莖段不定芽分化的影響
    3.13 不同品種的核桃莖段培養(yǎng)的比較
4 討論
    4.1 關(guān)于核桃的無(wú)融合生殖
    4.2 關(guān)于核桃胚培養(yǎng)
        4.2.1 滅菌方式、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的的選擇
        4.2.2 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的選擇
        4.2.3 褐化的防治
        4.2.4 不同取材時(shí)間及不同品種（系）的萌發(fā)成苗比較
    4.3 關(guān)于核桃莖段培養(yǎng)
    4.4 關(guān)于從核桃胚誘導(dǎo)體細(xì)胞胚的問(wèn)題
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄（圖版）
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2837344