石榴(Punica granatum L.)起源于中亞、西亞地區(qū),喜溫畏寒,在我國(guó)中、北部地區(qū)栽培容易遭受凍害。凍害嚴(yán)重制約了我國(guó)石榴產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,所以本研究主要從兩個(gè)方面開展工作:綜合評(píng)價(jià)6個(gè)石榴品種的抗寒性,篩選出可靠的石榴抗寒性鑒定指標(biāo),再用此指標(biāo)從80份石榴品種中篩選抗寒品種作為抗寒砧木或者培育抗寒品種的親本;用PgCBF1過量表達(dá)擬南芥初步分析石榴轉(zhuǎn)錄因子PgCBF1的功能,為石榴抗寒性分子機(jī)理研究奠定基礎(chǔ),為抗寒品種的培育提供依據(jù)。主要結(jié)果如下:1、休眠期取6個(gè)石榴品種的一年生枝條測(cè)組織含水量,并進(jìn)行5個(gè)溫度的冷脅迫處理,處理之后測(cè)一些生理、生化指標(biāo)的變化。最后用隸屬函數(shù)法綜合評(píng)價(jià)這6個(gè)品種的抗寒性,抗寒性由強(qiáng)至弱依次為:‘三白’、‘陜大籽’、‘蒙自甜綠籽’、‘青皮軟籽’、‘突尼斯軟籽’、‘以色列2號(hào)’。這一結(jié)果與相對(duì)電導(dǎo)率(REC)得出的順序一致,所以用REC評(píng)價(jià)石榴抗寒性是種可靠的方法。采用REC評(píng)價(jià)80份石榴品種的抗寒性得出,抗寒性最強(qiáng)的‘新疆紅皮’可以作為抗寒砧木或者培育抗寒品種的親本。2、qRT-PCR分析表明PgCBF1在‘突尼斯軟籽’根、莖、葉、花、果皮、種子組織中表達(dá)量沒有顯著差異。把擴(kuò)增得到PgCBF1目的片段與克隆載體pEASY-Blunt Zero連接,克隆得到目的片段。生物信息學(xué)分析可知PgCBF1的開放閱讀框(ORF)全長(zhǎng)714 bp,編碼237個(gè)氨基酸,蛋白分子量25.89 kDa,等電點(diǎn)5.69。PgCBF1屬于AP2/ERF家族,為典型的DREB1/CBF轉(zhuǎn)錄因子,且與擬南芥DREB1/CBF轉(zhuǎn)錄因子的相似性較高。3、構(gòu)建pBI121-PgCBF1表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化獲得轉(zhuǎn)基因陽性植株。表型觀察發(fā)現(xiàn),PgCBF1過表達(dá)擬南芥葉片明顯變小,葉柄變短,葉片顏色更綠;生長(zhǎng)緩慢,開花延遲20 d左右,部分植株甚至不開花;花序明顯短于野生型擬南芥。冷脅迫下,過表達(dá)擬南芥下游冷脅迫相關(guān)基因(COR15A、COR15B、RD29A、RD29B、RD22、COR47)表達(dá)量上調(diào)幅度大于野生型擬南芥。把PgCBF1過表達(dá)擬南芥和野生型擬南芥-10℃,處理4 h,處理完成后恢復(fù)生長(zhǎng)10 d。結(jié)果顯示野生型擬南芥大部分葉片發(fā)黃枯萎,而過表達(dá)擬南芥依然正常生長(zhǎng)。
【學(xué)位單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S665.4
【部分圖文】：

COR15B RT-F TACCCTCTACRD29A RT-F TTACGGTTTRD29A RT-R GCGAGTCTCRD29B RT-F GCTGAGAAGRD29B RT-R CTCTTCCCCRD22 RT-F GAGAACGGGRD22 RT-R ACACAACATCOR47 RT-F CGGTACCAGCOR47 RT-R GGACGTGA表達(dá)分析量分析 PgCBF1 在石榴根、莖、葉、花、果皮、種子中 6 個(gè)組織中的表達(dá)并無明顯差差異，在葉片中表達(dá)量M 根 莖 花 葉 果皮 種子

0.400.500.600.700.800.90根 莖 花 葉 果皮 種子對(duì)表達(dá)量相Relativeexpre組織Tissues圖 3.2 PgCBF1 的組織相對(duì)表達(dá)量Fig. 3.2 Relative expressions level of PgCBF1 in tissues.2 PgCBF1 基因的克隆以石榴葉片 RNA 逆轉(zhuǎn)錄得到的 cDNA 為模板，用高保真酶進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增目的片段段進(jìn)行膠回收，將回收的目的片段與 pEASY-Blunt Zero 克隆載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿R 檢測(cè)陽性克隆，酶切驗(yàn)證后，送生工公司進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與全基因組得出的序圖 3.4 所示。M － M－M

圖 3.4 測(cè)序結(jié)果注：劃線處為酶切位點(diǎn)Fig. 3.4 Result of sequence analysisNote: Underlined part of restriction enzyme cutting sitegtggctgtcctcgccctccgcggtcgctccgcctgcctcaacttcgccgactccgcgtggcggcttcccatcccgagctcagcctc3)gGGgGGgGGcCCgGGgGGcCCgGGgGGcCCcCCaAAtTTtTTgGGaAAgGGgGGcCCtTTgGGcCCaAAgGGaAAaAAgGGtTTgGGtTTtTTtTTcCCgGGgGGcCCaAAgGGgGGcCCtTTcCCgGGcCCcCCaAAgGGgGGaAAgGGgGGgGGaAAgGGcCCcCCtTTcCCcCCtTTcCCcCCtTTcCCcCCaAAgGGcCCaAAgGGtTTgGGgGGcCCcCCtTTgGGaAAaAAgGGcCCaAAcCCgGGaAAgGG3)cCCgGGcCCaAAgGGaAAgGGtTTcCCgGGaAAgGGcCCaAAgGGcCCgGGgGGcCCaAAgGGcCCgGGcCCtTTgGGaAAtTTtTTtTTgGGaAAgGGaAAgGGcCCcCCgGGaAAgGGgGGaAAgGGgGGaAAcCCcCCgGGgGGcCCaAAtTTaAAcCC

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉霞;侯樂峰;郝兆祥;畢潤(rùn)霞;李昭慧;馬敏;張立華;;以電導(dǎo)法評(píng)價(jià)12個(gè)石榴品種的抗寒性[J];經(jīng)濟(jì)林研究;2015年03期

2 蘇李維;李勝;馬紹英;戴彩虹;時(shí)振振;唐斌;趙生琴;蒲彥濤;;葡萄抗寒性綜合評(píng)價(jià)方法的建立[J];草業(yè)學(xué)報(bào);2015年03期

3 畢潤(rùn)霞;郝兆祥;侯樂峰;王慶軍;李昭慧;王艷琴;;電導(dǎo)法評(píng)價(jià)石榴抗寒性方法的探討[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年02期

4 白茹;高登濤;劉懷鋒;馮建榮;魯曉燕;;電導(dǎo)法協(xié)同Logistic方程比較12個(gè)葡萄砧木的抗寒性[J];石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年05期

5 玉蘇甫·阿不力提甫;阿依古麗·鐵木兒;帕提曼·阿布都熱合曼;李疆;;利用隸屬函數(shù)法綜合評(píng)價(jià)梨砧木抗寒性[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

6 陳佰鴻;張彪;毛娟;郝燕;楊瑞;蔡學(xué)海;齊尚友;;葡萄枝條水分含量變化與抗寒性關(guān)系[J];植物生理學(xué)報(bào);2014年04期

7 楊雪梅;苑兆和;尹燕雷;馮立娟;招雪晴;;不同石榴品種抗寒性綜合評(píng)價(jià)[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年02期

8 付曉偉;張倩;劉崇懷;樊秀彩;姜建福;郭大龍;曹亞平;;評(píng)價(jià)葡萄根系抗寒性指標(biāo)的確定[J];果樹學(xué)報(bào);2014年01期

9 隨少鋒;王玉崗;張友安;;低溫凍害對(duì)河南省滎陽市軟籽石榴成災(zāi)的分析與研究[J];北京農(nóng)業(yè);2013年27期

10 田景花;王紅霞;高儀;張志華;;核桃屬4樹種展葉期抗寒性鑒定[J];園藝學(xué)報(bào);2012年12期

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1 楊學(xué)芳;冬小麥苗期抗寒生理性狀自由水/束縛水的QTL分析[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 李敏;突尼斯軟籽石榴凍旱的發(fā)生與預(yù)防[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 任建偉;引進(jìn)優(yōu)良楊樹雜種無性系組培繁殖及抗寒性研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 朱淑新;轉(zhuǎn)基因741楊嫩枝扦插苗質(zhì)量評(píng)價(jià)及毛白楊成熟材料組培幼化[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 李玉梅;延邊地區(qū)梨品種資源抗寒性測(cè)定及抗塞生理的研究[D];延邊大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2823095