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CE-ECL技術(shù)檢測(cè)精胺方法的建立及內(nèi)源精胺與藍(lán)莓果實(shí)品質(zhì)關(guān)系的研究

發(fā)布時(shí)間:2020-08-06 15:08
【摘要】:毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光(CE-ECL)技術(shù)具備眾多優(yōu)勢(shì),如分辨率、分析速度、靈敏度等高效、選擇性良好、樣品消耗少、儀器小型易操作、成本低廉、應(yīng)用范圍廣泛等等,這些優(yōu)勢(shì)使得CE-ECL檢測(cè)技術(shù)在藥物分析、生物分析等領(lǐng)域應(yīng)用越來(lái)越廣泛。精胺是多胺的一種,因廣泛存在于生物體內(nèi)且對(duì)其本身產(chǎn)生重要的促進(jìn)作用而受到研究者的關(guān)注。藍(lán)莓花青苷因其豐富的藥理保健作用也倍受青睞。本文基于CE-ECL技術(shù)對(duì)含氮基團(tuán)的胺類(lèi)物質(zhì)在檢測(cè)方面的特有優(yōu)勢(shì)而建立了針對(duì)果蔬中精胺的分析檢測(cè)方法,同時(shí)研究了精胺對(duì)藍(lán)莓生長(zhǎng)發(fā)育以及采后保鮮貯藏期間部分指標(biāo)和功能性成分的影響。旨在為藍(lán)莓花青苷的積累,為藍(lán)莓果實(shí)的品質(zhì)提升作出詳細(xì)的理論基礎(chǔ)。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)建立了水果中精胺含量測(cè)定的毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光(CE-ECL)法。利用CE-ECL測(cè)定水果中精胺的含量,在優(yōu)化后的檢測(cè)條件下,結(jié)果顯示:精胺標(biāo)準(zhǔn)溶液在2×10~(-4)~3×10~(-1) mmol/L濃度范圍內(nèi)與ECL強(qiáng)度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,其線性方程為I=1114.2 c+99.41,相關(guān)系數(shù)r=0.9996(n=5),檢出限(S/N=3)為9.9×10~(-5) mmol/L。將該方法用于桑椹、蘋(píng)果和草莓3種樣品中精胺的分離檢測(cè),結(jié)果均含有精胺。桑椹、蘋(píng)果和草莓的加標(biāo)回收率分別為95.1%~101.2%、99.0%~100.8%和100.6%~106.0%。該方法具有分離高效、時(shí)間短、易上手操作、靈敏度高、成本低且樣品損耗量少等特點(diǎn)。(2)研究了藍(lán)莓生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中內(nèi)源精胺與其保鮮品質(zhì)和生理生化指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律以及相關(guān)性分析。以不同生長(zhǎng)時(shí)期的“佐治寶石”藍(lán)莓果實(shí)為試材,檢測(cè)其保鮮和生理生化指標(biāo)以及內(nèi)源精胺的含量。結(jié)果表明:首次發(fā)現(xiàn)了藍(lán)莓果實(shí)內(nèi)源精胺隨著發(fā)育期下降的變化規(guī)律。藍(lán)莓果實(shí)的內(nèi)源精胺與硬度、可滴定酸呈顯著正相關(guān),與可溶性糖呈顯著負(fù)相關(guān)。藍(lán)莓果實(shí)的內(nèi)源精胺與SOD、PPO、POD活性、總酚、類(lèi)黃酮含量呈顯著正相關(guān),與花青苷含量呈顯著負(fù)相關(guān)?梢(jiàn),內(nèi)源精胺與這些指標(biāo)之間的關(guān)系十分密切,但對(duì)花青苷的影響與前人研究相矛盾,有待進(jìn)一步的研究。為后續(xù)的基因組和代謝組研究指明了方向。(3)研究了外源精胺在不同貯藏溫度下對(duì)藍(lán)莓果肉精胺和果實(shí)花青苷、總酚、類(lèi)黃酮含量的影響。以“杰兔、園藍(lán)、藍(lán)沙、紅寶石”四個(gè)品種的藍(lán)莓為研究對(duì)象,0.3 mmol/L、0.9 mmol/L、1.5 mmol/L 3個(gè)濃度的外源精胺及0℃、4℃、20℃3個(gè)貯藏溫度處理,檢測(cè)不同條件下藍(lán)莓果實(shí)中花青苷、總酚、類(lèi)黃酮的含量。結(jié)果表明:隨著貯藏周期的延長(zhǎng),內(nèi)源精胺含量整體降低,且在第一個(gè)周期迅速衰減至正常水平。隨著貯藏溫度的升高,內(nèi)源精胺含量的衰減緩慢。貯藏后期,0.9 mmol/L外源精胺處理組的藍(lán)莓內(nèi)源精胺含量顯著高于其他處理組,有效減緩藍(lán)莓內(nèi)源精胺的降低。其他三個(gè)品種(園藍(lán)、藍(lán)沙、紅寶石)的變化規(guī)律均與杰兔藍(lán)莓相似?梢(jiàn),外源精胺對(duì)內(nèi)源精胺的影響是十分明確的,外源精胺對(duì)藍(lán)莓花青苷、總酚和類(lèi)黃酮的影響與其品種和貯藏溫度關(guān)聯(lián)性密切。推測(cè)精胺對(duì)藍(lán)莓花青苷、總酚和類(lèi)黃酮的影響不是直接的關(guān)系,可能是通過(guò)糖代謝間接影響的。這些研究為后續(xù)具體的作用機(jī)理的研究提供了方向和理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】:陜西理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2018
【分類(lèi)號(hào)】:S663.9
【圖文】:

電位,強(qiáng)度,決定性因素,光強(qiáng)度


數(shù)據(jù)計(jì)算均在 Microsoft Excel 2010 中完成。管電泳條件的優(yōu)化化光信號(hào)強(qiáng)度的一個(gè)決定性因素之一。實(shí)驗(yàn)中采號(hào)的影響。結(jié)果如下圖(2-1)所示,在 1.00 ~ 1.1而呈直線上升,在 1.10 ~ 1.2 V 之間,光強(qiáng)度噪比差,之后,繼續(xù)增加檢測(cè)電位,光強(qiáng)反而以 1.15 V 作為本實(shí)驗(yàn)的較優(yōu)檢測(cè)電位。

檢測(cè)池,脫質(zhì)子,強(qiáng)度,樣品


檢測(cè)池中濃度(a)和pH(b)對(duì)ECL強(qiáng)度的影響

液相色譜,強(qiáng)度,緩沖液,濃度


毛細(xì)管電泳是比高效液相色譜更依賴緩沖液的[3],合適的運(yùn)行緩沖液及其濃度和 pH對(duì)檢測(cè)物的分離、定性、定量是至關(guān)重要的。運(yùn)行緩沖液的濃度能通過(guò)影響毛細(xì)管壁對(duì)樣品的吸附能力而影響分離效果,運(yùn)行緩沖液的 pH 能通過(guò)影響毛細(xì)管內(nèi)部的電滲流而影響樣品的遷移時(shí)間。如圖 2-3(a),當(dāng)緩沖液的濃度為 12 mmol/L 時(shí),ECL 強(qiáng)度增到最大。而當(dāng)運(yùn)行緩沖液的 pH 在 7.8 時(shí) ECL 強(qiáng)度顯然較高(如圖 2-3(b))。故選擇 pH 7.8,濃度為 12 mmol/L 的硼酸-硼砂緩沖液。

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本文編號(hào):2782580

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