【摘要】：本文對(duì)秀珍菇與金頂側(cè)耳同屬之間的原生質(zhì)體融合育種進(jìn)行了研究,目的在于篩選出具有雙親優(yōu)良性狀的側(cè)耳屬優(yōu)勢(shì)新種菌株,豐富側(cè)耳屬種質(zhì)資源。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:對(duì)比秀珍菇和榆黃蘑在不同培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況。擬選取秀珍菇188和平頂榆黃蘑為原生質(zhì)體融合育種的親本材料。本試驗(yàn)從菌齡、酶濃度、酶解時(shí)間、酶解溫度、穩(wěn)滲液種類(lèi)及濃度、再生培養(yǎng)基種類(lèi)、融合劑濃度、原生質(zhì)體再生方式、原生質(zhì)體再生培養(yǎng)基類(lèi)型等方面進(jìn)行研究,采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),優(yōu)化了原生質(zhì)體制備、再生及融合的最佳條件。結(jié)果表明:最終確定的X188-1原生質(zhì)體制備的最佳條件:菌齡為8天、穩(wěn)滲液為0.6 mol/L甘露醇和10 mmol/LTris-HCl的混合穩(wěn)滲液,酶濃度1.6%,酶解時(shí)間160 min,酶解溫度29℃。在此條件下,原生質(zhì)體產(chǎn)量達(dá)到3.4×107CFU/mL,原生質(zhì)體再生率達(dá)到1.5%。PY-1原生質(zhì)體制備的最佳條件:菌齡為8天、穩(wěn)滲液為0.6mol/L甘露醇和10mmol/LTris-HCl的混合穩(wěn)滲液,酶濃度1.6%,酶解時(shí)間160min,酶解溫度29 ℃。在此條件下,原生質(zhì)體產(chǎn)量達(dá)到4.7×107CFU/mL,原生質(zhì)體再生率達(dá)到1.7%。在不同酸性條件下對(duì)雙親菌絲體生長(zhǎng)速度進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明:pH3條件下兩親本菌株生長(zhǎng)狀況有巨大差異,將pH3作為原生質(zhì)體融合育種的自然遺傳標(biāo)記之一。采取單親滅活的方式進(jìn)行融合育種,將X188-1單核菌株滅活后與PY-1單核菌株融合,然后在PH3的條件下篩選融合子。觀(guān)察不同滅活處理下原生質(zhì)體的再生涂布結(jié)果,篩選原生質(zhì)體熱滅活的最佳溫度和時(shí)間。結(jié)果表明:65℃水浴25 min作為滅活條件既可達(dá)到完全滅活,又能保證原生質(zhì)體不至于損傷太嚴(yán)重,且熱滅活效果穩(wěn)定,重復(fù)性強(qiáng)。觀(guān)察原生質(zhì)體間的融合情況和原生質(zhì)體的存活情況,篩選出最佳濃度和聚合度的PEG融合劑,結(jié)果表明:在35%PEG4000促融條件下,原生質(zhì)體融合率最高,且原生質(zhì)體受損程度較小。通過(guò)對(duì)原生質(zhì)體融合過(guò)程的觀(guān)察,證明了原生質(zhì)體融合的可行性。本試驗(yàn)以高溫滅活和pH篩選為初篩標(biāo)記,再通過(guò)鏡檢鎖狀聯(lián)合獲得一株融合子,經(jīng)純化后獲得一株遺傳性狀穩(wěn)定的融合子菌株R1。拮抗試驗(yàn)表明融合子與雙親存在一定的遺傳差異,經(jīng)ISSR分子標(biāo)記技術(shù)證明融合子含有雙親遺傳物質(zhì)。
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S646
【圖文】：

長(zhǎng)速度很慢，原因可能是松木屑難以分解利用，菌絲生長(zhǎng)速度低至一個(gè)最小限度。逡逑２．３．３秀珍菇與平頂榆黃蘑在對(duì)照組上的出菇圖片逡逑由圖１觀(guān)察可知，秀珍菇五個(gè)品種之間在外觀(guān)上存在較大差異。平頂榆黃蘑ＰＹ子逡逑實(shí)體傘蓋呈現(xiàn)金黃色，秀珍菇子實(shí)體傘蓋呈現(xiàn)不同程度的灰色。出菇試驗(yàn)結(jié)果顯示，秀逡逑珍菇與榆黃蘑子實(shí)體在外觀(guān)和顏色上性狀穩(wěn)定，且這兩種食用菌之間有較大差異，可以逡逑作為一個(gè)很好的原生質(zhì)體融合親本材料。逡逑Ａ邐Ｂ邐Ｃ逡逑費(fèi)邐＂逡逑ｎ邐…＇邐＇．＂Ｖ逡逑Ｖ’邐＼逡逑Ｄ邐Ｅ邐參邐Ｆ逡逑？邋：邐．邐…Ｉ遽逡逑．ｌｉＢｅａ，邐－邐Ｘｔ＇＇＇邐－逡逑二一邋．．．．逡逑圖１中Ａ－Ｆ分別為秀珍菇１８、秀珍菇１８８、秀珍菇１６３、秀珍菇１９５、秀珍菇７０５、平頂榆黃蘑ＰＹ逡逑在對(duì)照組培養(yǎng)料上的出菇照片。逡逑Ｉｎ邋Ｆｉｇ．邋１，Ａ－Ｆ邋ａｒｅ邋ｔｈｅ邋ｐｉｃｔｕｒｅｓ邋ｏｆ邋ＸＩ８，邋ＸＩ８８，邋Ｘ１６３？邋ＸＩ９５，邋Ｘ７０５，邋ＰＹ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｍｅｄｉｕｍ邋ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．逡逑－１２邋－逡逑

圖３菌絲體菌齡對(duì)原生質(zhì)體制備及再生影響逡逑Ｆｉｇ．邋３邋Ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｆｕｎｇｕｓ邋ａｇｅ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ逡逑３酶解液濃度對(duì)原生質(zhì)體制備及再生影響逡逑酶濃度從０．４邋％增大到１．２邋％時(shí)，原生質(zhì)體產(chǎn)量迅速增加。酶濃度由丨．２邋％時(shí)，原生質(zhì)體產(chǎn)量增加速度變緩，原因是酶的效用值達(dá)到一個(gè)最高點(diǎn)。隨度繼續(xù)提升，原生質(zhì)體產(chǎn)量開(kāi)始降低，原生質(zhì)休的完整性逐漸被破壞，伴隨的活力下降，原生質(zhì)體再生率也下降。所以，最佳酶濃度應(yīng)控制在１．６邋％。逡逑一？一闈生鹿體產(chǎn)里原生質(zhì)沐再生軍逡逑４－．邐ｒ邋１．６逡逑ｉ３５＿邐－１４逡逑２－ｏｓ

３．３．１０原生質(zhì)體萌發(fā)逡逑原生質(zhì)體在液體培養(yǎng)的條件下容易萌發(fā)且容易觀(guān)察，將原生質(zhì)體液體培養(yǎng)２邋ｄ時(shí)取逡逑１０邋ｐＬ，用熒光增白劑染色，熒光顯微鏡觀(guān)察，結(jié)果見(jiàn)圖９。逡逑■逡逑■岕逡逑圖９中Ａ為原生質(zhì)體萌發(fā)圖片（放大倍數(shù)Ｋ）Ｘ４０），Ｂ為原生質(zhì)體萌發(fā)（放大倍數(shù)１２Ｘ１００）時(shí)圖逡逑片，Ｃ、Ｄ、Ｅ為（放大倍數(shù)１２Ｘ１００）時(shí)對(duì)應(yīng)的紅藍(lán)綠通道熒光圖片逡逑Ｆｉｇ．邋９邋Ａ邋ｉｓ邋ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ邋（ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋１０邋ｘ邋４０）邋ｉｍａｇｅ邋ｏｆ邋ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ，邋Ｂ邋ｉｓ邋ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ邋（１２邋ｘ邋ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ逡逑１００）邋ｉｍａｇｅ邋ｏｆ邋ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ，邋Ｃ，邋Ｄ，邋Ｅ邋ｉｓ邋（ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋１２ｘ１００）邋ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ邋ｉｍａｇｅｓ邋ｗｉｔｈ邋ｒｅｄ，邋ｂｌｕｅ邋ａｎｄ邋ｇｒｅｅｎ逡逑ｃｈａｎｎｅｌ邋ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ逡逑－２６－逡逑

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本文編號(hào)：2781015