發(fā)布時(shí)間：2020-07-28 10:14

【摘要】：云南金花茶是云南特有極小種群植物,已列入云南省2010~2015年的極小種群物種拯救保護(hù)緊急行動(dòng)計(jì)劃。按照IUCN評(píng)估標(biāo)準(zhǔn),該種屬于 極危種‖(CR A1c)等級(jí)。試驗(yàn)采用SSR分子標(biāo)記技術(shù)分析云南金花茶不同種群的遺傳多樣性,闡述不同種群云南金花茶的遺傳變異情況,并以帶葉腋的嫩莖為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)試驗(yàn),比較不同消毒時(shí)長(zhǎng)、培養(yǎng)基種類及激素濃度對(duì)云南金花茶外植體消毒效果、增殖培養(yǎng)及生根培養(yǎng)的影響情況,建立一套完整、穩(wěn)定的云南金花茶離體快繁體系。主要研究結(jié)果如下:1、利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),一共獲得了95,979條含SSR位點(diǎn)的EST序列,豐富了云南金花茶EST數(shù)據(jù)庫(kù),并從中篩選獲得了14對(duì)具有多態(tài)性的引物,單個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因數(shù)為2~8個(gè),共擴(kuò)增出68個(gè)等位基因,位點(diǎn)平均等位基因數(shù)為4.8571,位點(diǎn)的平均有效等位基因數(shù)為2.7130。平均Shannon’s信息指數(shù)I為1.0925,表現(xiàn)出較高的多態(tài)性。2、云南金花茶8個(gè)群體多態(tài)性位點(diǎn)百分率(PPB)在42.86%~100%,不同群體間存在著明顯的遺傳參數(shù)差異,多態(tài)性均較高。基因流(Nm)值范圍在0.0503~0.9820之間,平均值為0.54401,說(shuō)明云南金花茶群體間的基因交流程度較低。通過(guò)遺傳結(jié)構(gòu)分析將8個(gè)群體大致分為3個(gè)類群,遺傳變異主要發(fā)生在群體內(nèi),占總變異的49.95%。3、研究發(fā)現(xiàn)云南金花茶具有較高的遺傳多樣性,其豐富的遺傳多樣性可能是由于分布區(qū)的生境多樣化和物種較長(zhǎng)的進(jìn)化歷史所決定的,自然群體之間幾乎沒(méi)有基因交流,群體分化水平較低。4、以云南金花茶幼嫩莖段為外植體,用75%酒精消毒10s,0.1%升汞消毒10min后,接種在培養(yǎng)基MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L中培養(yǎng),污染率為15%,腋芽誘導(dǎo)率達(dá)90%,不定芽生長(zhǎng)良好;WPM培養(yǎng)基適宜作為云南金花茶組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基。最佳增殖培養(yǎng)基為WPM+6-BA 3.0 mg/L+IAA 0.3 mg/L,增值系數(shù)為6.83,平均苗高3.5cm,苗粗壯、長(zhǎng)勢(shì)好;1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+NAA0.3 mg/L+0.3 g/L AC為云南金花茶生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基,在此培養(yǎng)基上,生根條數(shù)平均為4條,生根率為100%;云南金花茶組培苗移栽至紅土:腐殖土=2:1基質(zhì)中,50d后成活率達(dá)95%,幼苗長(zhǎng)勢(shì)好。
【學(xué)位授予單位】：西南林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S685.14
【圖文】：

西南林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文18圖1 不同重復(fù)基元的比例Figure 1 The percentage of different motifs repeats2.4.3 EST-SSR 引物篩選利用云南金花茶部分樣品開(kāi)發(fā) EST-SSR 多態(tài)性引物，采用 1.5%的瓊脂糖電泳凝膠對(duì) SSR-PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行初步結(jié)果檢測(cè)。初步獲得了 50 對(duì)條帶清晰、反應(yīng)穩(wěn)定的 EST-SS 引物，經(jīng)瓊脂糖凝膠檢測(cè)條帶單一、明亮、無(wú)拖尾，特異性引物與模板 DNA 鏈之間有很高的結(jié)合（圖 2）。見(jiàn)圖 3，而有部分 SSR 引物 PCR產(chǎn)物出現(xiàn)兩條帶和拖尾現(xiàn)象，說(shuō)明這些引物擴(kuò)增出了非特異性條帶；另外，有部分?jǐn)U增條帶較暗，甚至有的完全沒(méi)有擴(kuò)增出條帶，表明該引物的特異性不強(qiáng)，不能與模板 DNA 很好的結(jié)合，應(yīng)當(dāng)選擇棄用，但也有可能是因?yàn)樗玫哪０?DNA的質(zhì)量較差，從而影響了與引物之間的結(jié)合，需重新提取高質(zhì)量的 DNA 模板。

2 云南金花茶遺傳多樣性分析19圖2 引物與部分模板DNA的PCR擴(kuò)增結(jié)果Figure 2 Primer and partial template DNA PCR amplification products圖3 引物與部分模板DNA的PCR擴(kuò)增結(jié)果Figure 3 Primer and partial template DNA PCR amplification products2.4.4 引物多態(tài)性檢測(cè)把初步篩選獲得的 50 對(duì)EST-SSR 引物的擴(kuò)增產(chǎn)物送至昆明碩擎生物科技有限公司進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)，應(yīng)用 MEGA7 和 MUSCLE 軟件對(duì)檢測(cè)得到的序列進(jìn)行比對(duì)及校正，最后用 Excel 2003 進(jìn)行擴(kuò)增片段測(cè)序的統(tǒng)計(jì)，并對(duì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果采用 GenAlEx 6.5 軟件分析每個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性。結(jié)果表明，14 對(duì)引物的具有多態(tài)性，各位點(diǎn)部分樣品擴(kuò)增的熒光檢測(cè)結(jié)果如圖 4。并將這 14 對(duì) EST-SSR 引物的序列信息提交到 NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中，進(jìn)行 Blast 比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)其中有 6 對(duì)引物所在的基因序列具有明確的基因注釋

圖2 引物與部分模板DNA的PCR擴(kuò)增結(jié)果Figure 2 Primer and partial template DNA PCR amplification products圖3 引物與部分模板DNA的PCR擴(kuò)增結(jié)果Figure 3 Primer and partial template DNA PCR amplification products2.4.4 引物多態(tài)性檢測(cè)把初步篩選獲得的 50 對(duì)EST-SSR 引物的擴(kuò)增產(chǎn)物送至昆明碩擎生物科技有限公司進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)，應(yīng)用 MEGA7 和 MUSCLE 軟件對(duì)檢測(cè)得到的序列進(jìn)行比對(duì)及校正，最后用 Excel 2003 進(jìn)行擴(kuò)增片段測(cè)序的統(tǒng)計(jì)，并對(duì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果采用 GenAlEx 6.5 軟件分析每個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性。結(jié)果表明，14 對(duì)引物的具有多態(tài)性，各位點(diǎn)部分樣品擴(kuò)增的熒光檢測(cè)結(jié)果如圖 4。并將這 14 對(duì) EST-SSR 引物的序列信息提交到 NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中，進(jìn)行 Blast 比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)其中有 6 對(duì)引物所在的基因序列具有明確的基因注釋

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 汪夢(mèng)婷;張貴良;劉云;辛亞龍;辛培堯;唐軍榮;;云南金花茶礦質(zhì)元素及功能成分分析[J];黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué);2018年04期

2 張貴良;張貴生;張昆;王東;平珊瑚;袁志祥;;云南金花茶的繁育技術(shù)[J];林業(yè)科技通訊;2015年02期

3 ;編輯寄語(yǔ)[J];上海集郵;2002年09期

4 張貴良;張貴生;張昆;王東;平珊瑚;;云南金花茶野生資源調(diào)查與分析[J];廣東林業(yè)科技;2015年01期

5 張貴良;汪夢(mèng)婷;劉云;辛培堯;唐軍榮;;云南金花茶花的礦質(zhì)元素及功能成分分析[J];福建熱作科技;2017年02期

6 趙鍶琪;李斌;張貴良;辛培堯;唐軍榮;;提高云南金花茶組培苗移栽成活率的方法[J];中國(guó)林副特產(chǎn);2017年04期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李斌;云南金花茶遺傳多樣性分析及其離體快繁研究[D];西南林業(yè)大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2772736