【摘要】：牡丹(Paeonia Sufruticosa)市場前景廣闊,然而,牡丹的種苗繁殖無法滿足當(dāng)前世界花卉、醫(yī)藥大市場對成品牡丹苗木的需求。為了盡快解決牡丹種苗快速工廠化生產(chǎn)和加快新品種培育進(jìn)程這兩大難題,開展牡丹的離體再生與遺傳轉(zhuǎn)化研究是具有重大意義的。本研究以牡丹品種'鳳丹'為材料,建立并優(yōu)化了牡丹成熟胚、幼胚、愈傷組織、子葉節(jié)、子葉片、土芽離體再生系統(tǒng),并初步建立了牡丹子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化體系。在離體再生階段分別研究了不同外植體、消毒方法、不同激素濃度及其配比對不定芽誘導(dǎo)、不定茅伸長及生根等離體再生過程的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):1、不同外植體的最佳不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基分別為WPM+2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA(成熟胚)、WPM+0.4 mg/L 6-BA+2 mg/L GA_3(幼胚)、WPM+3 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 肌醇(愈傷組織)、WPM+0.3 mg/L 6-BA+2 mg/LGA_3(子葉節(jié))、WPM+1 mg/L 6-BA+0.3 mg/LNAA(子葉片)、WPM+1mg/L6-BA+0.1 mg/LNAA(土芽);2、最佳的不定芽伸長培養(yǎng)基為:WPM+0.3 mg/L 6-BA+1.5 mg/L GA_3,伸長率為81.12%,芽的均伸長長度可達(dá)1.93 cm;3、采用嫁接法生根效果最佳,移栽后存活率可達(dá)66.54%。以牡丹子葉節(jié)為受體材料,研究了農(nóng)桿菌菌株類型、乙酰丁香酮濃度、菌液濃度和侵染時間、共培養(yǎng)時間、pH值、溫度對牡丹遺傳轉(zhuǎn)化體系的影響。初步建立了牡丹子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化體系。結(jié)果發(fā)現(xiàn):選擇EHA105(農(nóng)桿堿型)作為外源基因?qū)氲墓こ叹容^合適;適宜的乙酰丁香酮(AS)濃度(200μmol/L)、菌液濃度(OD600為0.8)、侵染時間(30min)、共培養(yǎng)時間(3 d)、共培養(yǎng)培養(yǎng)基pH值(5.4)、共培養(yǎng)溫度(22℃)均能有效提高牡丹子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的瞬時表達(dá)頻率。應(yīng)用該轉(zhuǎn)化體系成功獲得牡丹的轉(zhuǎn)基因抗性苗,轉(zhuǎn)化效率約為1.33%。
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S685.11
【圖文】：

芽誘導(dǎo)過程中上述二者Ｈｆ能呈現(xiàn)相反的作用。本試驗設(shè)置不同６－ＢＡ和ＧＡ３的濃度組合，逡逑對牡丹幼胚進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，以探究ＢＡ與ＧＡ；對幼胚不定芽誘導(dǎo)的影響。逡逑在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)３－４周后，幼勝逐漸愈傷化并誘導(dǎo)出不定芽（圖１－２）。逡逑結(jié)果如表１－３所不，相較了＇不添加激素的培養(yǎng)基，添加激素的處理明顯誘導(dǎo)效果更佳。逡逑當(dāng)６－ＢＡ濃度在０－０．４邋ｍｇ／Ｌ、ＧＡ３濃度在０－２邋ｍｇ／Ｌ范圍時，不定芽誘導(dǎo)率和平均不定芽逡逑數(shù)都逐漸增加，負(fù)６－ＢＡ為０．４邋ｍｇ／Ｌ、ＧＡ３為２邋ｍｇ／Ｌ時，不定芽誘導(dǎo)率和平均不定芽數(shù)逡逑分別為７７．３８％和１．９３個。，６－ＢＡ和ＧＡ３濃度較高時，雖然平均不定芽數(shù)較高，但不逡逑定芽長勢纖細(xì)，誘導(dǎo)率較低，其原因可能是高濃度６－ＢＡ和0八３會產(chǎn)生拮抗作用，不利逡逑于不定芽的誘導(dǎo)。因此，牡幾幼胚的最佳不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：ＷＰＭ邋＋邋０．４ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ邋＋逡逑２邋ｍｇ／Ｌ邋ＧＡ３邋0逡逑表１－３不同激素組合對牡丹幼胚不定芽發(fā)生的影響逡逑Ｔａｂｌｅ邋１－３邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｈｏｍｉｏｎｅｓ邋ｏｎ邋ｉｍｍａｔｕｒｅ邋ｅｍｂｒｙｏｓ逡逑ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ邋

２．４子葉節(jié)不定芽分化研究逡逑在不定芽分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)２－３周后，子葉節(jié)開始膨大、伸長，節(jié)端部位出現(xiàn)出芽逡逑點，４－６周后，分化出不定芽（圖１－４）。從表中可以看出，相較于不添加激素的處理，逡逑添加激素組合處~i屮的＋定芽誘導(dǎo)效果明顯更優(yōu)

【參考文獻(xiàn)】

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1 胡云飛;徐國兵;;牡丹皮及其主要成分丹皮酚的藥理作用研究進(jìn)展[J];安徽醫(yī)藥;2014年04期

2 李艷梅;;牡丹深加工迎來發(fā)展新機(jī)遇[J];中國花卉園藝;2014年05期

3 陳慧玲;楊彥伶;張新葉;戴均華;李振芳;徐紅梅;;油用牡丹研究進(jìn)展[J];湖北林業(yè)科技;2013年05期

4 李霞;;牡丹的食用價值[J];現(xiàn)代園藝;2013年15期

5 姚冉;石美麗;潘沈元;沈桂芳;張志芳;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)進(jìn)展;2011年04期

6 王鋒;申軍偉;劉改芝;楊榮;;牡丹繁殖技術(shù)[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2011年06期

7 鄧向陽;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2010年04期

8 劉會超;賈文慶;;魏紫牡丹腋芽組織培養(yǎng)的快速繁殖技術(shù)[J];核農(nóng)學(xué)報;2010年03期

9 安阿莉;蘇小玲;毛娟;陳佰鴻;;紫斑牡丹幼胚離體培養(yǎng)試驗[J];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2009年06期

10 高昌勇;;牡丹胚離體培養(yǎng)的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年19期

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1 黃雪清;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米優(yōu)良自交系遺傳轉(zhuǎn)化研究及成熟胚再生系統(tǒng)的建立[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2004年

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1 毛程鑫;牡丹籽油組成成分及脫酸精制技術(shù)的研究[D];河南工業(yè)大學(xué);2015年

2 毛倉倉;不同因素對牡丹體胚發(fā)生早期誘導(dǎo)的影響[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 王瑤;兩種芍藥愈傷組織的誘導(dǎo)及褐化抑制的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2009年

4 張穎星;牡丹離體快繁及多胺對組培苗生根影響的研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2008年

5 蘇晶;牡丹容器苗的根控技術(shù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

6 安佰義;牡丹組培離體再生系統(tǒng)的建立[D];東北林業(yè)大學(xué);2005年

本文編號：2736318