【摘要】：本研究對(duì)小孢子培養(yǎng)過(guò)程中影響出胚率的因素作進(jìn)一步探討,建立甘藍(lán)DH植株根系再生植株體系,并以小孢子培養(yǎng)獲得的DH群體進(jìn)行SSR分析,構(gòu)建甘藍(lán)DH系的DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù),為甘藍(lán)品種特異性、真實(shí)性、親緣關(guān)系以及雜交提供參考依據(jù)。本試驗(yàn)主要研究了小孢子培養(yǎng)基添加不同濃度的PEG4000、PEG6000、DMSO以及四種碳源對(duì)甘藍(lán)誘導(dǎo)出胚效果的影響。甘藍(lán)DH植株根系再生時(shí)培養(yǎng)基種類、不同6-BA和NAA濃度配比、根齡對(duì)植株再生的影響以及不同基因型植株再生能力差異性分析。利用近源物種1500對(duì)引物篩選出具有特異性、穩(wěn)定性的引物來(lái)分析同母株來(lái)源的DH植株的遺傳穩(wěn)定性和基因差異性,田間調(diào)查甘藍(lán)DH株的變異系數(shù)。針對(duì)難出胚材料,通過(guò)微型化甘藍(lán)小孢子培養(yǎng)流程的研究來(lái)建立甘藍(lán)單花蕾培養(yǎng)體系,探討甘藍(lán)單花蕾培養(yǎng)的可行性和發(fā)展前景。主要獲得以下結(jié)論:1、在甘藍(lán)小孢子培養(yǎng)的NLN培養(yǎng)基中添加不同濃度PEG4000、PEG6000、DMSO和不同的碳源與對(duì)照相比均能顯著的提高甘藍(lán)小孢子的膨大比率和出胚率,誘導(dǎo)效果在三種材料間存在顯著性差異。材料X17-4在0.0125M的PEG4000的處理下,出胚率達(dá)到最高12.9胚/蕾。材料438中添加0.2%的DMSO出胚率能達(dá)到最大值13.5胚/蕾。材料X17-4的出胚率在0.2M蔗糖+0.2M山梨醇的處理下達(dá)到最大15.2胚/蕾。2.利用甘藍(lán)DH系根系進(jìn)行外植體擴(kuò)繁是有效的擴(kuò)繁方式。20d根齡的甘藍(lán)根系外植體在MS+0.030 mg/L NAA+4.5 mg/L6-BA+6mg/L AgNO_3培養(yǎng)基上能達(dá)到最好的培養(yǎng)效果,愈傷誘導(dǎo)率和不定芽誘導(dǎo)率最高達(dá)96.0%和82.0%。甘藍(lán)三種基因型DH植株根系間誘導(dǎo)分化結(jié)果存在極顯著性差異,甘藍(lán)基因型是影響根系再生植株的一個(gè)主要因素。3.從1500對(duì)甘藍(lán)近源物種引物中篩選出26對(duì)能擴(kuò)增出特異片段的引物,用這26對(duì)引物對(duì)47份甘藍(lán)同母株來(lái)源的小孢子植株DNA進(jìn)行擴(kuò)增,得到了106條帶,其中多態(tài)性帶為43條,多態(tài)性帶的比率為41%,平均每個(gè)引物產(chǎn)生了4.07條帶和1.72條多態(tài)帶。同母株來(lái)源的DH小孢子植株具有良好的遺傳穩(wěn)定性和遺傳差異性,結(jié)論與田間性狀調(diào)查實(shí)際相符。DH系的開(kāi)展度變異系數(shù)為10.54%,株高的變異系數(shù)為11.49%,外葉數(shù)的變異系數(shù)為15.84%。4.觀察發(fā)現(xiàn)小孢子單花蕾培養(yǎng)在充沛的誘導(dǎo)培養(yǎng)基里懸浮培養(yǎng),可經(jīng)過(guò)完整的游離小孢子胚發(fā)育途徑發(fā)育成胚。材料438經(jīng)單花蕾培養(yǎng)初步得到10胚/蕾的出胚率,甘藍(lán)單花蕾小孢子培養(yǎng)是一種有效的獲得更多的胚狀體的新途徑,具有可行性。
【圖文】：

N 培養(yǎng)基中添加 4 種濃度 PEG 對(duì) X17-4 材料小孢子膨大及出胚的作用效果 ）小孢子膨大效果 ；B.0.0125M PEG4000 膨大效果；C.0.025M PEG4000 膨G6000 膨大效果 E. 0.025M PEG6000 膨大效果 F.0 M PEG（CK）出胚效果EG4000 出胚效果；H. 0.025M PEG4000 出胚效果；I. 0.0125M PEG6000 出胚0.025M PEG6000 出胚效果 medium added different concentrations of PEG on the X17-4 material and the efenlargement of microspore embryo medium(100 ×) (CK) microspore expansion effect ; B. the expansion effect of 0.0125M PEG4000ct of 0.025M PEG4000 ; D. the expansion effect of 0.0125M PEG6000 E. the 25M PEG6000 F.the embryo effect of 0 M PEG (CK ) ; G.the embryo effect of 0. the embryo effect of 0.025M PEG4000; I. the embryo effect of 0.0125M PEG600embryo effect of 0.025M PEG6000.

N 培養(yǎng)基中添加不同濃度 DMSO 對(duì) X17-4 材料小孢子膨大及出胚的作用O（CK）小孢子膨大效果；B. 0.2% DMSO 膨大效果；C. 1% DMSO 膨大; E. 0% DMSO（CK）出胚效果； F. 0.2% DMSO 出胚效果；G. 1% DM果；H. 2% DMSO 出胚效果.medium added different concentrations of DMSO on the X17-4 material and tenlargement of microspore embryo medium (100 x)CK) B. the expansion effect of 0.2% DMSO;C. the expansion effect of 1% DMect of 2% DMSO ; E.the embryo effect of 0% DMSO (CK); F.the embryo effeSO;G. the embryo effect of 1% DMSO ; H. the embryo effect of 2% DMSO.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S635

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2655744