【摘要】：十字花科根腫病是一種世界性的病害,由活體寄生性的蕓薹根腫菌(Plasmodiophora brassicae Woron)引致。近年來,上海地區(qū)十字花科根腫病的發(fā)生面積逐年擴大,危害程度不斷加劇。小青菜是上海地區(qū)種植的主要綠葉菜品種,小青菜根腫病也常年有較大的發(fā)生面積。國內(nèi)外利用農(nóng)業(yè)措施、化學(xué)藥劑、抗病品種、生物防治等方法防治根腫病,但效果不佳。本實驗通過選用常規(guī)栽培的6個普通小青菜品種在上海弘陽農(nóng)莊基地進行抗根腫病對比試驗,對感病植株與正常植株的一些生理指標進行測試,并試圖找到一種實驗室分子檢測根腫菌方法;克隆出小青菜根部鉀離子通道基因BcAKT1。實驗對小青菜根腫病的發(fā)病機理進行了初步探索,希望對進一步探究根腫病的發(fā)病機理及防治方法提供參考。(1)小青菜品種‘超越808’與‘福盛218’發(fā)病指數(shù)大于30,表現(xiàn)感病;‘青陽’與‘金品夏戀’發(fā)病指數(shù)在10-20之間,表現(xiàn)耐病;‘超越909’與‘金品綠優(yōu)美’發(fā)病指數(shù)小于10,表現(xiàn)抗性較高,其中‘金品綠優(yōu)美’發(fā)病指數(shù)為0,表現(xiàn)最好�！鹌肪G優(yōu)美’可作為當?shù)馗[病病區(qū)主要的生產(chǎn)品種及輔助育種材料。(2)在小青菜生長期測得每個品種感病植株的葉長、葉寬、株高、葉綠素含量、可溶性蛋白含量、SOD含量、Na~+含量等都低于正常生長的植株,可溶性糖含量、K~+含量、K~+/Na~+含量等都高于正常生長的植株。這些生理指標對進一步研究普通白菜根腫病的發(fā)病生理機制提供了參考。不同品種感病植株在生長期到成熟期可溶性糖含量的變化和品種有關(guān),可溶性蛋白也與品種有關(guān),成熟期的過氧化物酶活性(POD)高于生長期。(3)探索實驗室分子檢測方法,設(shè)計了三種特異性引物對于田間采集的健康植株根部組織、得病的小青菜根中的病原菌、得病的花菜根中的病原菌、土壤中提取的病原菌進行PCR檢測,結(jié)果表明:以IST為特異性引物可以檢測出得病植株根部或者帶病土壤中是否帶有根腫菌。(4)成功克隆出小青菜鉀離子通道基因BcAKT1,并對小青菜鉀離子通道基因BcAKT1在植株中的表達模式分析:初步推測鉀離子通道BcAKT1與根腫病的發(fā)病有著密切的聯(lián)系,在成熟期,小青菜得病后BcAKT1在植物根部的表達量高于正常植株在根部表達量,比值為1.59:1。
【圖文】：

圖 4-1 1-4 以 Zgzb4 模板擴增目的片段凝膠電泳圖Fig.4-1 The gelelectrophoretogram of target segments引物 ITS-F：（5’-AGGTGAACCTGCGGAAGGAT -3’）和 ITS-RGTAATCCTACCT-3’ ） 以 及 03F1 ： （GTGTCGCTGTTATT-3’ ） 和 03R1 ： （TTCATCGTTGTGA-3’）為模板 PCR 檢測結(jié)果н圖 4-2 所示：8 7 6 5 4 3 2 1 M

圖 5-1 擴增目的片段凝膠電泳結(jié)果Fig.5-1 The electrophoresis of target segments amplification products1-AKT1 片段，M-DNA 5000bpMarker糖凝膠電泳結(jié)果顯示分別得到了相應(yīng)片段大小的條帶（圖 5-1）大約rker 為 5000bp）， 本結(jié)果表明我們通過 PCR 成功克隆到了 BcAKT1菌陽性克隆的 PCR 鑒定結(jié)果糖凝膠電泳結(jié)果顯示 10 個管子中 8 號和 9 號得到了相應(yīng)片段大小果表明 8 號和 9 號可能成陽性。之后再送往鉑尚測序公司去測序，9 號沒有測通，8 號測序成功。將所得的序列у BcAKT1 在 DNAMAN析，，沒有堿基突變，說明克隆得到的序列為正確的 BcAKT1 序列。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S436.36

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本文編號：2625068