【摘要】：芍藥(Paeonia lactiforaPall.)是中國(guó)傳統(tǒng)名花,提高繁殖效率是對(duì)其進(jìn)行商品化、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的基本保障。但在組織培養(yǎng)方面,一直無(wú)法建立成熟的離體再生體系,嚴(yán)重制約了產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的進(jìn)程,也進(jìn)一步制約了分子生物學(xué)的深入開(kāi)展。本研究通過(guò)體細(xì)胞胚直接和間接發(fā)生途徑、愈傷組織再分化途徑進(jìn)行芍藥的植株再生研究;同時(shí),還系統(tǒng)研究了芍藥各類(lèi)花器官的愈傷組織誘導(dǎo)情況,從而豐富可選擇外植體種類(lèi);并以此為依托,對(duì)愈傷組織的褐化問(wèn)題和更新培養(yǎng)展開(kāi)探究,以保證愈傷組織的長(zhǎng)期有效利用。主要結(jié)果如下:1、芍藥體細(xì)胞胚間接發(fā)生研究:高濃度的2,4-D(2.0 mg/L)和連續(xù)的暗培養(yǎng)(90天)誘導(dǎo)胚性愈傷組織產(chǎn)生;胚性愈傷組織在1/2MS(Ca2+加倍)+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L的培養(yǎng)基中,見(jiàn)光培養(yǎng)60天,發(fā)育至圓球形胚、心形胚階段。芍藥的體細(xì)胞胚起源方式包括外起源和內(nèi)起源兩個(gè)途徑。在外起源方式中包括單個(gè)表層細(xì)胞的外起源和多個(gè)表層下細(xì)胞的共同起源。胚性細(xì)胞的分裂方式為對(duì)稱(chēng)分裂,未發(fā)現(xiàn)不對(duì)稱(chēng)分裂細(xì)胞的存在。2、體細(xì)胞胚直接發(fā)生初探:6-BA的單獨(dú)使用或是與2,4-D、NAA、TDZ、KT的聯(lián)合使用,均不能誘導(dǎo)芍藥合子胚直接產(chǎn)生體細(xì)胞胚;合子胚成苗培養(yǎng)結(jié)果顯示,低濃度6-BA和GA3的1/2MS(Ca2+加倍)培養(yǎng)基促進(jìn)芍藥子葉中間抽出真葉;IBA和IAA的聯(lián)合使用促使芍藥小苗抽生出大量不定根;這其中雜種芍藥1號(hào)(自育,未命名)相較于常規(guī)的二倍體品種'粉玉奴',小苗長(zhǎng)勢(shì)明顯旺盛。3、愈傷組織再分化研究:芍藥地下芽的未伸展莖段為誘導(dǎo)愈傷組織再分化的理想材料;高濃度的ABA(1.0或1.5mg/L)協(xié)同低濃度的NAA、6-BA(低于0.5 mg/L)共同促進(jìn)愈傷組織轉(zhuǎn)化為預(yù)分化狀態(tài);及時(shí)降低生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的濃度,促進(jìn)愈傷組織分化出白色或綠色棒狀不定芽;無(wú)激素培養(yǎng)基促進(jìn)白色不定芽生長(zhǎng)為明顯可見(jiàn)的氣生根,綠色棒狀不定芽頂端則逐漸出現(xiàn)缺口,分化出兩片幼葉;經(jīng)過(guò)低濃度的6-BA和2,4-D共同培養(yǎng),小苗莖葉分化明顯,葉片展開(kāi);但在常用IBA和IAA的生根配方中,不能促進(jìn)小苗抽生不定根。4、花器官愈傷組織誘導(dǎo)研究:在各類(lèi)花器官類(lèi)型中,愈傷組織誘導(dǎo)表現(xiàn)排序?yàn)樽臃颗咧榛ò昊ㄋ幓ńz;花瓣的基部相較于其他部位更利于愈傷組織的誘導(dǎo);子房和胚珠的愈傷組織皆來(lái)源于子房?jī)?nèi)部胎座組織;雄蕊培養(yǎng)中,花藥和花絲直接死亡,愈傷組織全來(lái)自花粉的有絲分裂。1.0 mg/LNAA+1.0 mg/L2,4-D適用于所有花器官愈傷組織的誘導(dǎo);單獨(dú)使用150 mg/L的VC有利于緩解愈傷組織褐化;在1/2MS(Ca2+加倍)培養(yǎng)基中添加低濃度的2,4-D、6-BA、TDZ適用于所有衰弱、老化愈傷組織的更新培養(yǎng)。
【圖文】：

‘東陽(yáng)金色’芍藥的愈傷組織在６號(hào)和７號(hào)培養(yǎng)基中呈現(xiàn)淡綠色團(tuán)塊狀，表面干逡逑燥具有細(xì)小白色顆粒狀突起，而且在６號(hào)培養(yǎng)基中獲得最大增殖倍數(shù)２．８７，邋７號(hào)培逡逑養(yǎng)基中雖然增殖倍數(shù)較小為１．５４，但是仍然出現(xiàn)少量同類(lèi)愈傷組織（圖４－３，邋ｂ）；逡逑其他７種培養(yǎng)基中并沒(méi)有出現(xiàn)形態(tài)上的變化，而是維持原愈傷組織形態(tài)，仍為團(tuán)塊逡逑狀愈傷組織，表面光滑（圖４－３，邋ａ，表４－７）。相較于品種‘東陽(yáng)金色’芍藥，‘Ｇｏｉｎｇ逡逑Ｂａｎａｎａｓ’芍藥只在５號(hào)培養(yǎng)基中出現(xiàn)少量表面帶有綠色突起的愈傷組織類(lèi)型，其他８逡逑種培養(yǎng)基中愈傷組織只是緩慢轉(zhuǎn)綠，仍為團(tuán)塊狀（表４－８）。通過(guò)方差分析可知，生逡逑長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑ＡＢＡ為影響愈傷組織分化的最重要因素。逡逑另外，各處理的愈傷組織增殖倍數(shù)與增殖試驗(yàn)中相比明顯下降，猜測(cè)和ＡＢＡ的逡逑加入有很大關(guān)系。ＡＢＡ又名脫落酸，會(huì)抑制細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)分裂，，從而促使細(xì)胞轉(zhuǎn)向成逡逑熟分化。逡逑３６逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S682.12

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本文編號(hào)：2612713