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耐寒無核葡萄胚挽救種質(zhì)創(chuàng)新研究

發(fā)布時(shí)間:2020-04-02 21:39
【摘要】:無核葡萄多屬于歐亞種,品質(zhì)優(yōu)良,但耐寒性普遍較差,在冬季寒冷環(huán)境下易發(fā)生凍害。我國(guó)擁有豐富的抗寒野生葡萄資源,通過雜交的方式將其抗寒性與歐亞種葡萄無核-優(yōu)良特性結(jié)合,利用胚挽救技術(shù)可獲得新種質(zhì)。本研究以30份野生葡萄資源和24個(gè)不同品種葡萄為試材,通過人工低溫模擬試驗(yàn),探究葡萄枝條在低溫脅迫下的生理響應(yīng),建立不同葡萄品種抗寒性綜合評(píng)價(jià)的方法,并以主栽歐亞種無核鮮食葡萄和抗寒性強(qiáng)的親本進(jìn)行田間雜交,結(jié)合胚挽救技術(shù),獲得雜種后代。通過分析不同親本雜交組合、繼代培養(yǎng)基類型及離體幼胚發(fā)育成苗及大田煉苗移栽定植等影響因素,旨在進(jìn)一步提高無核葡萄胚挽救育種效率。對(duì)獲得的雜種幼苗進(jìn)行抗寒無核分子標(biāo)記輔助選擇,為耐寒無核葡萄育種提供具有參考價(jià)值的新材料。主要研究結(jié)果如下:(1)課題組已收集30份野生抗寒葡萄資源,根據(jù)形態(tài)學(xué)特征分為兩類,通過建立資源圃的方式完成野生葡萄種質(zhì)資源的安全保存。(2)運(yùn)用隸屬函數(shù)法建立了不同葡萄品種抗寒性綜合評(píng)價(jià)的方法。24個(gè)不同葡萄品種抗寒性存在差異,強(qiáng)弱順序?yàn)?雙豐、河岸10號(hào)、雙優(yōu)、山河1號(hào)、北醇、絳縣山葡萄、貝達(dá)、無核翠寶、5BB、北冰紅、麗紅寶、晶紅寶、京亞、紅地球、戶太8號(hào)、S04、早康寶、早黑寶、晚黑寶、秋紅寶、紫提、夏黑、紅寶石無核及維多利亞。(3)雜交親本對(duì)胚挽救效率影響較大。紅寶石無核作母本進(jìn)行雜交時(shí),胚形成率達(dá)到13.7%和13.8%,而晶紅寶作母本時(shí),胚形成率僅為1.3%和0.0%;北冰紅為父本進(jìn)行雜交時(shí),胚形成率分別為14.2%、13.7%及0.0%,而山河1號(hào)為父本時(shí),分別為1.3%、1.5%、6.6%及13.8%,達(dá)到顯著性差異。(4)通過葉片結(jié)構(gòu)差異、氣孔大小和形態(tài)、染色體數(shù)目的顯微觀察及分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)已獲得的部分胚挽救雜種幼苗進(jìn)行早期輔助選擇。從紅寶石無核×北冰紅、麗紅寶×山河1號(hào)2個(gè)組合F1代雜種共13個(gè)株系中初步鑒定出4個(gè)無核株系,2個(gè)耐寒株系;從早黑寶×紅寶石無核雜交后代中鑒定獲得1個(gè)三倍體株系。
【圖文】:

葡萄


于母本花穗柱頭上方均勻抖動(dòng)使其散落于柱頭上,授粉完成后迅速套袋,連逡逑續(xù)授粉2d。更換花粉時(shí)使用酒精擦拭鑷子和手,更換脫脂棉團(tuán),防止花粉交叉污染。逡逑如圖2-1所示。逡逑is邋B逡逑圖2-1葡萄去雄與授粉逡逑Fig.2-1邋Grape邋emasculating邋and邋pollination逡逑注:a:葡萄人工去雄;b:噴水去除殘留花粉;c:葡萄去雄后套袋標(biāo)記;d:母本最佳授粉時(shí)機(jī);e:逡逑人工授粉;f:授粉后3d。逡逑Note:邋a:邋Grape邋artificial邋emasculation;邋b:邋Water邋spray邋to邋remove邋residual邋pollen;邋c:邋Grape邋bags邋labeled邋after逡逑emasculating;邋d:邋Optimum邋timing邋of邋female邋pollination;邋e:邋Artificial邋pollination;邋f:邋3邋days邋after邋pollination.逡逑2.5.8葡萄胚挽救程序逡逑胚挽救雜交幼果的采集工作于6?7月進(jìn)行,采集不同發(fā)育時(shí)期的雜交幼果,,帶回山逡逑西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院實(shí)驗(yàn)室,雜交幼果采集時(shí)間以雜交最后一次授粉日期開始計(jì)算。在逡逑超凈工作臺(tái)中使用75%乙醇浸泡30邋s,無菌水沖洗3次,再用0.2%的升汞溶液浸泡20逡逑min,無菌水沖洗3次,期間來回震蕩3?5次,以保證充分滅菌。將幼果中胚珠剝離,逡逑將長(zhǎng)度>2邋mm的胚珠接種至胚形成培養(yǎng)基中,每個(gè)三角瓶中接種20個(gè)胚珠左右,進(jìn)行逡逑避光培養(yǎng)。胚珠培養(yǎng)約9周后,在解剖鏡下縱切胚珠,于喙部挑出白色胚接種值胚萌發(fā)逡逑培養(yǎng)基中

葡萄種子,沙藏


r>邋_逡逑L、,J_灥,~栧義賢跡玻參蘚似咸雅咄煬瘸擅玨義希疲椋紓玻插澹櫻澹澹洌歟澹螅簀澹紓潁幔穡邋澹澹恚猓潁镥澹潁澹螅悖酰椋睿玨澹椋睿簦镥澹穡歟幔睿簦簀義獻(xiàn)ⅲ海幔喝斯とバ酆蟮幕▃i;b:剝離胚珠;c:胚珠培養(yǎng);d:經(jīng)離體培養(yǎng)胚珠內(nèi)的幼胚(箭頭指示);逡逑e?f:胚萌發(fā);g?i:胚發(fā)育成苗。標(biāo)尺為1邋mm。逡逑Note邋:邋a:邋Emasculation;邋b:邋the邋ovule邋stripping;邋c:邋Ovules邋cultured邋in邋medium;邋d:邋Developmental邋embryo逡逑(arrow)邋in邋the邋ovule;邋g ̄i:邋Embryo邋development邋into邋plants.邋Bars邋are邋1邋mm.逡逑2.5.9不同葡萄品種種子沙藏與播種逡逑參照王慶蓮[lw]等方法進(jìn)行。種子層積試驗(yàn)于2016年11月15邋R于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園逡逑藝教學(xué)試驗(yàn)站(N37°25'44〃,E112°34'53",海拔773.34邋m)進(jìn)行。參試葡萄品種為北冰逡逑紅、戶太8號(hào)及戶太8號(hào)x北冰紅雜利1邋F1邋0邐逡逑圖2-3葡萄種子沙藏逡逑Fig.2-3邋Grape邋seeds邋stratification逡逑注.?邋a:園土與河沙=1:邋1,濕度適宜;b-c:將葡萄種子放入尼龍袋中,置于裝有沙藏介質(zhì)的瓦盆中;逡逑山蓋磚封盆。逡逑Note:邋a:邋Mixing邋the邋garden邋soil邋with邋the邋river邋sand邋1:1
【學(xué)位授予單位】:山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2018
【分類號(hào)】:S663.1

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本文編號(hào):2612477

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