【摘要】：矮牽牛(Petunia hybrida)為茄科矮牽牛屬的多年生草本花卉,原產(chǎn)于南美阿根廷,花色豐富,可廣泛用于室內(nèi)外盆栽和花壇造景,是世界各國應(yīng)用最多的草本花卉之一。目前矮牽牛多采用雜交育種技術(shù),而植物原生質(zhì)體融合技術(shù)可克服遠緣雜交親和性差的困難,為矮牽牛新品種的培育開辟新途徑。本實驗以矮牽�！皦艋谩毕盗�(Petuniahybrida‘Dream’)白色花高代自交系品種SH-2015-1為實驗材料,針對矮牽牛愈傷組織誘導(dǎo)、原生質(zhì)體分離及純化的技術(shù)進行研究,建立穩(wěn)定的愈傷組織原生質(zhì)體分離及純化體系,為進一步的矮牽牛原生質(zhì)體培養(yǎng)和細胞融合奠定基礎(chǔ),為矮牽牛新品種培育提供種質(zhì)資源。1.矮牽牛愈傷組織的誘導(dǎo)以矮牽牛無菌苗葉片為外植體,接種到激素組合為MS+6-BA(1.0mg/L)+NAA(0.1 mg/L)的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基,培養(yǎng)溫度(24±1)℃,光照14 h·d~(-1),光照強度3000 lux,6-7 d在中脈和葉緣切口處形成肉眼可見的黃綠色愈傷組織,培養(yǎng)15 d愈傷組織呈團狀聚集在培養(yǎng)基的表面,愈傷組織誘導(dǎo)率為67.5%。將誘導(dǎo)出的愈傷組織從初代培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)入MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA的培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng),為后續(xù)原生質(zhì)體的分離及純化研究提供植物材料。2.矮牽牛原生質(zhì)體的分離及培養(yǎng)(1)原生質(zhì)體分離體系的建立取繼代培養(yǎng)10-15 d的愈傷組織進行原生質(zhì)體的分離,適宜的酶液組合為2%纖維素酶R-10+0.5%果膠酶Y-23+0.3%離析酶R-10,酶液中添加0.5 mol/L的甘露醇作為滲透壓調(diào)節(jié)劑,愈傷組織黑暗條件下靜置酶解12 h,20℃溫度下1100 rpm離心2 min,棄去上清液,相同溫度和轉(zhuǎn)速下重復(fù)洗滌2次,獲得純化的原生質(zhì)體產(chǎn)量和活性分別達到3.4×10~6個/g和83%。(2)原生質(zhì)體培養(yǎng)體系的建立本實驗通過滲透壓濃度、培養(yǎng)密度、激素組合等因素,對矮牽牛愈傷組織原生質(zhì)體的培養(yǎng)體系進行了初步探討。實驗發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)3 d原生質(zhì)體破裂程度達50%,培養(yǎng)7 d原生質(zhì)體均溶解分散。有關(guān)矮牽牛愈傷組織原生質(zhì)體培養(yǎng)體系的建立有待進一步研究。
【圖文】：

（5）脫蠟與顯微觀察將上述處理完后的切片，連同載玻片一起在通風(fēng)櫥中，用純二甲苯溶液浸透20 min，，再換入另一純二甲苯溶液中持續(xù) 15 min。最后將脫蠟完的石蠟切片放置在正置顯微鏡下從低倍到高倍調(diào)節(jié)物鏡觀察。2.2 結(jié)果與分析2.2.1 穴盤播種育苗矮牽牛于秋季 10 月中旬播種，播種后約 3~5 d 胚根突破種皮，6~10 d 左右發(fā)芽。期間保持穴盤的介質(zhì)濕潤，栽培至 20 d 長出 2 片真葉，待其具有 5-6 片真葉時，將小苗根部用基質(zhì)包裹成根球后移栽定植入花盆中，剛出土?xí)r幼苗扎根不耐旱，因此包裹根部的土質(zhì)要要保持濕潤。帶土移植優(yōu)點在于避免根裸露在空氣中，對幼苗起到保護作用，促進苗木成活。根毛是植物從土壤中汲取水分的器官，根毛是植物吸水的主要器官，被破壞后會導(dǎo)致幼苗死亡。移植后將幼苗適當(dāng)?shù)倪M行遮陰處理，以利于緩苗。

圖 2-2 穴盤播種育苗1：A 培養(yǎng)基中的愈傷組織 2：B 培養(yǎng)基中的愈傷組織 3：C 培養(yǎng)基中的愈傷組織4：D 培養(yǎng)基中的愈傷組織 5：E 培養(yǎng)基中的愈傷組織 6：F 培養(yǎng)基中的愈傷組織Fig 2-2 Seedling in the plug1：Callus in the medium A 2：Callus in the medium B 3：Callus in the medium C4：Callus in the medium D 5：Callus in the medium E 6：Callus in the medium F2.2.3.2 莖段愈傷組織的誘導(dǎo)將帶芽莖段接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng) 2~3 周左右，愈傷組織在與培養(yǎng)基接觸表面的部位和切口處逐漸產(chǎn)生形成。實驗共設(shè)置 12 個處理組合，各處理誘導(dǎo)形成的愈傷組織情況差異顯著。25 d 后觀察統(tǒng)計的愈傷組織情況詳見表 2-3。結(jié)果表明：在不添加激素的 MS 基本培養(yǎng)基上，不能誘導(dǎo)帶芽莖段形成愈傷組織，葉片出現(xiàn)變黃萎蔫、部分褐化的現(xiàn)象；在僅添加 6-BA 的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，0.5~2.0 mg.L-1三個濃度的 6-BA 均能誘導(dǎo)少量愈傷組織的形成，并有不定芽的發(fā)生。由此可見，6-BA 對于誘導(dǎo)葉片外植體的形態(tài)分化十分有利；僅添加 NAA 的培養(yǎng)基上也有少量的愈傷組織形成，但愈傷組織生長極慢，愈傷組織不分化，NAA濃度由 0.1 mg.L-1升至 0.5 mg.L-1時，愈傷組織誘導(dǎo)率呈下降趨勢，同時添加 1.0
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S681.9

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本文編號：2611564