【摘要】：榛子為榛科(Corylaceae)榛屬(Corylus L.)植物,其營(yíng)養(yǎng)豐富,風(fēng)味獨(dú)特,深受消費(fèi)者喜愛。榛子不僅擁有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,經(jīng)濟(jì)價(jià)值,還具有藥用價(jià)值和商業(yè)價(jià)值。從榛葉和樹干中可提煉出紫衫醇,更凸顯了榛子的研究?jī)r(jià)值。本研究利用SSR、SRAP兩種分子標(biāo)記研究榛屬種質(zhì)資源的遺傳多樣性及種間親緣關(guān)系,為我國(guó)榛屬資源保護(hù)、優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源的利用以及新品種選育提供理論依據(jù)。主要結(jié)果如下:1.篩選出條帶清晰,多態(tài)性好的32對(duì)SSR引物、28對(duì)SRAP引物用于榛屬種質(zhì)資源的遺傳多樣性及親緣關(guān)系分析;對(duì)所選32對(duì)SSR引物進(jìn)行了退火溫度的篩選,分別對(duì)SSR-PCR,SRAP-PCR擴(kuò)增體系進(jìn)行了優(yōu)化。2.SSR、SRAP引物的平均多態(tài)位點(diǎn)百分比分別是88.14%,100%。兩種分子標(biāo)記均能在榛屬植物中有效擴(kuò)增,可以用于榛屬植物的遺傳多樣性研究�；赟SR標(biāo)記榛屬種質(zhì)資源的主要遺傳多樣性指數(shù):等位基因數(shù),有效等位基因數(shù),香農(nóng)指數(shù),Nei’s遺傳多樣性指數(shù)平均值分別是4.8125、3.6576、1.3803、0.714�；赟RAP標(biāo)記的榛屬種質(zhì)資源的主要遺傳多樣性指數(shù):等位基因數(shù),有效等位基因數(shù),香農(nóng)指數(shù),Nei’s遺傳多樣性指數(shù)平均值分別是1.8904、1.6468、0.5459、0.3701。兩種分子標(biāo)記在榛屬種質(zhì)資源的遺傳多樣性指數(shù)均說(shuō)明榛屬植物有較高的遺傳多樣性。3.基于SSR標(biāo)記的榛屬資源種間遺傳多樣性指數(shù)可知,榛屬種間的遺傳多樣性大小依次為平榛平歐雜種榛華榛川榛歐榛毛榛絨苞榛�；赟RAP標(biāo)記的榛屬資源種間的遺傳多樣性指數(shù)可知榛屬種間的遺傳多樣性大小依次為歐榛平榛平歐雜種榛毛榛川榛華榛絨苞榛。兩種分子標(biāo)記均顯示我國(guó)原產(chǎn)的榛屬資源中平榛遺傳多樣性最高,絨苞榛遺傳多樣性最低。4.SSR標(biāo)記和SRAP標(biāo)記的分子方差分析結(jié)果均顯示榛屬植物的遺傳分化大多發(fā)生在種群內(nèi)(SSR=84%;SRAP=89%),少數(shù)發(fā)生在種群間。5.依據(jù)遺傳距離和遺傳一致度及聚類結(jié)果顯示平榛與平歐雜種榛的親緣關(guān)系最近,藏刺榛和絨苞榛的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。聚類結(jié)果還顯示毛榛與平榛親緣關(guān)系較近,藏刺榛與川榛、華榛聚在一組親緣關(guān)系較近。滇榛與絨苞榛親緣關(guān)系近但與其它種親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。聚類結(jié)果與材料來(lái)源地有一定的相關(guān)性。兩種標(biāo)記雖然不能夠?qū)⑺虚粚俜N群完全區(qū)分開,但是聚類結(jié)果能夠在一定程度上反映了榛屬資源的遺傳多樣性和親緣關(guān)系。主坐標(biāo)分析與對(duì)應(yīng)分子標(biāo)記的聚類結(jié)果大致相同。
【圖文】：

1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)時(shí)，條帶明亮程度反映總DNA的濃度，條帶越亮DNA濃度越高。根據(jù)電泳槽干凈與否，條帶有無(wú)拖尾，是否有RNA條帶，條帶清晰程度來(lái)判斷DNA的質(zhì)量，若點(diǎn)樣孔無(wú)殘留，條帶明亮，且完整清晰，，無(wú)拖尾，無(wú)雜帶，表示此DNA可備選用。用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度及純度時(shí)，依據(jù)OD260/OD280的比值評(píng)判DNA質(zhì)量;當(dāng)OD260/OD280<1.6時(shí)，說(shuō)明DNA溶液中有多糖、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，OD260/OD280>1.9時(shí)，說(shuō)明樣品中存在RNA等雜質(zhì)。OD260 /OD280 范圍在1.7～1.8之間的DNA溶液可備用(楊曉旭，2017)。3.2 SSR 引物及最佳退火溫度篩選結(jié)果3.2.1 SSR 引物篩選篩選引物的原則首先是引物擴(kuò)增條帶清晰且能分清主條帶，其次是條帶具有多態(tài)性。從圖 1 中可以看出 1 號(hào)、2 號(hào)、3 號(hào)、5 號(hào)、7 號(hào)、8 號(hào)、9 號(hào)、10 號(hào)、11 號(hào)引物主條帶清晰且多態(tài)性好，個(gè)別有雜帶拖帶現(xiàn)象，但可以通過(guò)調(diào)節(jié)退火溫度得到改善。4 號(hào)、6號(hào)引物雖然多態(tài)性單一但條帶清晰，無(wú)雜帶可暫時(shí)選用，若在種群擴(kuò)增多態(tài)性差時(shí)再棄之。12 號(hào)引物條帶不清晰棄之不用。

3 結(jié)果與分析選定前三個(gè)濃度（0.1U、0.15U、0.2U）為 Taq DNA 聚合酶基礎(chǔ)濃度；引物濃度在前兩個(gè)濃度時(shí)條帶較模糊，從第三個(gè)濃度開始條帶清晰，所以選擇 0.6μmol/L、0.8μmol/L、1.0μmol/L 作為基礎(chǔ)濃度；Mg2+濃度篩選中前四個(gè)濃度的條帶除第 2 濃度條帶模糊，其它 3 個(gè)濃度的條帶清晰，所以選定前三個(gè)濃度（0.5mmol/L、1.0mmol/L、1.5mmol/L）為基礎(chǔ)濃度。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S664.4

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3 李京t

本文編號(hào)：2608895