定量PCR技術(shù)已經(jīng)成為基因表達(dá)水平測定最常用的方法,選擇合適的內(nèi)參基因?qū)虮磉_(dá)水平的準(zhǔn)確定量至關(guān)重要。本文檢測了菊黃東方鲀β-actin、GAPDH、EF1-α和18S rRNA等4種內(nèi)參基因在不同組織、生長環(huán)境和發(fā)育階段中的表達(dá),應(yīng)用3種內(nèi)參基因篩選軟件(geNorm、NormFinder和Bestkeeper)綜合分析了這4種內(nèi)參基因表達(dá)的穩(wěn)定性。結(jié)果表明內(nèi)參基因在成魚養(yǎng)殖和野生菊黃東方鲀內(nèi)的穩(wěn)定性排名均為:EF1-α>β-actin>18S rRNA>GAPDH;在養(yǎng)殖菊黃東方鲀3月齡、6月齡和12月齡三個(gè)發(fā)育階段中內(nèi)參基因EF1-α最穩(wěn)定,其他各組織在不同發(fā)育階段內(nèi)參基因的選擇有所差異。研究結(jié)果為不同條件下菊黃東方鲀功能基因表達(dá)的定量分析提供重要參考。

【文章頁數(shù)】：12 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 總RNA提取及cDNA合成
    1.3 引物設(shè)計(jì)和標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    1.5 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 總RNA和cDNA質(zhì)量鑒定
    2.2 引物特異性及RT-qPCR效率
    2.3 備選內(nèi)參基因的表達(dá)譜
    2.4 備選內(nèi)參基因在不同發(fā)育階段的菊黃東方鲀中穩(wěn)定性分析
        2.4.1 geNorm分析
        2.4.2 NormFinder分析
        2.4.3 BestKeeper分析
        2.4.4 綜合排名分析
    2.5 備選內(nèi)參基因在組織中的穩(wěn)定性分析
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