太平洋鱈(Gadus macrocephalus)是我國(guó)北方海域重要的經(jīng)濟(jì)魚類。近年來(lái),由于捕撈量劇增,導(dǎo)致其野生資源不斷下降。本實(shí)驗(yàn)室的太平洋鱈人工繁育技術(shù)不斷取得突破,但在育苗早期過程中仍會(huì)出現(xiàn)仔稚魚突發(fā)性大量死亡現(xiàn)象。為解決這一瓶頸,本實(shí)驗(yàn)從太平洋鱈自身免疫系統(tǒng)出發(fā),通過RAG1、Ig M和ISG15基因的轉(zhuǎn)錄水平來(lái)衡量太平洋鱈免疫系統(tǒng)的早期發(fā)育特點(diǎn),以期為人工育苗早期階段有針對(duì)性的做好疾病防疫工作提供理論依據(jù)。首先,根據(jù)已報(bào)道的其它硬骨魚類的RAG1、Ig M和ISG15基因序列的保守區(qū)設(shè)計(jì)兼并引物,以太平洋鱈幼魚的胸腺和頭腎為實(shí)驗(yàn)材料,經(jīng)過基因克隆測(cè)序,獲得目的基因片段。為研究太平洋鱈發(fā)育早期免疫系統(tǒng)形成的機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)建立了絕對(duì)熒光定量PCR檢測(cè)方法,分別對(duì)目的基因在太平洋鱈各組織以及發(fā)育早期階段中的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)。另外,利用Western Blot技術(shù)從蛋白水平對(duì)RAG1在組織中的表達(dá)差異進(jìn)行了分析。實(shí)驗(yàn)得出結(jié)果如下:太平洋鱈RAG1基因c DNA序列長(zhǎng)3755 bp,包括一個(gè)1854 bp的ORF,可編碼617個(gè)氨基酸殘基,預(yù)測(cè)其分子量為69 k Da,Gen Bank...

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1太平洋鱈頭腎組織總RNAFig.1-1GelelectrophoresisoftotalRNAfromGadusmacrocephalus18s

CL顯色液于PVDF膜上，暗室透明塑料薄膜覆蓋PVDF膜。X射線攝影暗匣中曝光1min迅速浸于顯影液中顯影，然后液中定影10min以上。掃描儀成像，拍照。的克隆與分析組織中提取總RNA，進(jìn)行瓊度計(jì)測(cè)定3個(gè)總RNA提取液總RNA提取效果相對(duì)較好....

圖1-4太平洋鱈RAG1標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒電泳Fig.1-4GelelectrophoresisofRAG1standardplasmidfromGadusmacrocephalus1000bp

圖1-4太平洋鱈RAG1標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒電GelelectrophoresisofRAG1standardplasmidfromRNA提取洋鱈300dph幼魚和成年雌性親魚的胸腺（、腸（In）、性腺（Go）的總RNA，進(jìn)行瓊光光度計(jì)測(cè)定其濃度和A26....

圖1-7RAG1的熔解曲線

分別繪制出引物qRAG1（10μM，包括上、下游引物）不同的兩個(gè)反應(yīng)體系所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并分別得到回歸方程和+37.50，R2=0.995；y=-3.251x+39.57，R2=0.998。根據(jù)斜率slop=10[-1/slope]-1可知，當(dāng)斜率接近-3.....

圖1-6熒光定量引物qRAG1b的檢驗(yàn)Fig.1-6GelelectrophoresisofPCRproducttotesttheabsolutequantitativeprimerqRAG1b100bp

一章太平洋鱈RAG1基因cDNA的克隆與組分別繪制出引物qRAG1（10μM，個(gè)反應(yīng)體系所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并2=0.995；y=-3.251x+39.57，R2=可知，當(dāng)斜率接近-3.322時(shí)，PCR應(yīng)體系中添加引物qRAG1（10μM，500

本文編號(hào)：4027521