甲殼素在自然界中的含量極其豐富,是僅次于纖維素的第二大多聚物,殼聚糖可由甲殼素制備而得。殼聚糖降解產(chǎn)物在醫(yī)學、農(nóng)業(yè)、工業(yè)等多個行業(yè)中都有著很高的應用價值,比如,殼寡糖可以顯著提高魚類的免疫力,是優(yōu)良的水產(chǎn)飼料添加劑。由于殼聚糖的分子量大,溶解度低,使得其直接應用往往具有較大的局限性。因此,探索對殼聚糖進行高效降解具有重要的理論和生產(chǎn)意義。解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)是廣泛存在于自然界中的芽孢桿菌屬的成員。利用以殼聚糖為唯一碳源的選擇性培養(yǎng)基,我們篩選到一株可以高效降解殼聚糖的解淀粉芽孢桿菌,并開展其殼聚糖酶活性的研究,得到如下結(jié)果:1、根據(jù)細菌的形態(tài)、生理生化特征,并結(jié)合16SrDNA和gyrA基因,鑒定該細菌為解淀粉芽孢桿菌,并對該菌株進行命名為HZ-1510。2、克隆了解淀粉芽孢桿菌HZ-1510的殼聚糖酶基因,通過生物信息學技術(shù)分析了該基因的結(jié)構(gòu),該殼聚糖酶基因開放讀碼框全長為837 bp,可以編碼279個氨基酸,分子量大小為31.45 kDa。在其氨基末端具有信號肽,切割點位于第36位和37位氨基酸之間。氨基酸序列同源性分析結(jié)果顯示該殼聚...

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【學位級別】：碩士

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圖１－１不同類型殼聚糖酶的水解位點示意圖??

殼聚糖酶作用于殼聚糖分子的還原性末端，專一性水解部分乙�；臍ぞ厶侵�??兩個氨基葡糖殘基之間的卩－１，４糖苷鍵產(chǎn)生殼寡糖。根據(jù)其水解位點的不同可分為三??類（如圖１－１）。第Ｉ類殼聚糖酶能水解乙酰葡萄糖胺一氨基葡萄糖鍵（ＧｌｃＮＡｃ—ＧｌｃＮ）??和氨基葡萄糖一氨基葡萄糖鍵（Ｇｌ....

圖２－１解淀粉芽孢桿菌Ｈ１１５１０的分離和細菌形態(tài)??１：殼聚糖選擇性培養(yǎng)基中生長的細菌；２：?ＬＢ培養(yǎng)基中生長的細菌形態(tài)??

２．３．２菌株１６ＳｒＤＮＡ鑒定結(jié)果??用細菌１６Ｓ?ｒＤＮＡ通用引物對崗株進行ＰＣＲ擴增，然后用１％瓊脂糖凝膠電泳??檢測，結(jié)果如圖２－２所示：在１０００?ｂｐ和２０００?ｂｐ?Ｍ?Ｗ?？糸約１４５０?ｂｐ的條帶。??Ｉ?Ｍ??＿?２０００?ｂｐ??＜—１４４９?ｂｐ??＜—１....

圖２－２細菌〗６Ｓ?ｒＤＩＮＡ基因電泳圖??Ｍ：?ＤＬ－２０００?ＤＮ?Ａ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?１６Ｓ?ｒＤＮＡ?ＰＣＲ?擴增產(chǎn)物??

１?２??圖２－１解淀粉芽孢桿菌Ｈ１１５１０的分離和細菌形態(tài)??１：殼聚糖選擇性培養(yǎng)基中生長的細菌；２：?ＬＢ培養(yǎng)基中生長的細菌形態(tài)??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｍｏｒｐｈｏＪｏｇｙ?ｏ＼?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ａｍｙｔｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ?....

圖３－１殼聚糖酶基因編碼序列的電泳圖??

３．３．１殼聚糖酶基因的克隆結(jié)果??利用引物Ｃｈｉ－Ｆｌ和Ｃｈｉ－Ｒｌ克隆得到的殼聚糖酶基因編碼序列，電泳檢測結(jié)果??顯示，有一條大小位于７５０?ｂｐ和ｌＯＯＯｂｐ之間的特異條帶（圖３－１），片段大小與預??期相符。??Ｍ?１??２０００?ｂｐ??１０００ｂｐ??８３７?ｂｐ??....

本文編號：4020500