發(fā)布時(shí)間：2024-12-22 00:54

　　半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)是我國(guó)北方重要的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)魚類之一,它味道鮮美,適應(yīng)性強(qiáng),雌性生長(zhǎng)速度是雄性的2-3倍,因此了解半滑舌鰨的性腺分化與發(fā)生,攻克性別決定機(jī)制對(duì)單性育種、提高育種質(zhì)量等意義重大。目前,半滑舌鰨性別決定機(jī)制尚不十分清楚,且沒(méi)有發(fā)現(xiàn)決定其性別分化的決定基因。因此對(duì)半滑舌鰨性別決定相關(guān)基因進(jìn)行功能分析顯得非常緊迫,可以為人工控制半滑舌鰨性別提供基礎(chǔ)資料。本研究根據(jù)半滑舌鰨全基因組測(cè)序獲得的部分序列,通過(guò)中間序列驗(yàn)證及RACE末端擴(kuò)增,得到半滑舌鰨HH信號(hào)通路csshh、csdhh、csptchl x1、csptchl x2、cssmo等5個(gè)基因的cDNA全長(zhǎng)；通過(guò)RT-PCR分析了csshh、csdhh、csptchl x1、csptchl x2、cssmo、csglil等6個(gè)基因在早期胚胎發(fā)育、雌雄成體不同組織、雌雄性腺發(fā)育不同期的表達(dá)；檢測(cè)了csshh、csdhh、csptchl x1等3個(gè)基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化程度；通過(guò)FISH定位分析了csptchl x1與csptchl x2在染色體中的位置；通過(guò)ISH定位分析了csdhh、csptch...

【文章頁(yè)數(shù)】：127 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
0 前言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 HH信號(hào)通路的組成
    1.2 HH信號(hào)通路的功能
        1.2.1 HH的結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.2 PTCH的結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.3 SMO的結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.4 GLI的結(jié)構(gòu)和功能
    1.3 HH信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)
    1.4 半滑舌鰨性別決定基因研究現(xiàn)狀
    1.5 本研究的目的與意義
2 半滑舌鰨HH信號(hào)通路csshh、csdhh、csptch1 x1、csptch1 x2、cssmo基因的克隆
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要儀器和試劑
        2.1.3 方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 遺傳性別鑒定
        2.2.2 生理性別鑒定
        2.2.3 cDNA序列分析
        2.2.4 同源比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
    2.3 討論
        2.3.1 cDNA序列結(jié)構(gòu)分析
        2.3.2 系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
3 半滑舌鰨csshh、csdhh、csptch1 x1、csptch1 x2、cssmo、csgli1在早期胚胎的表達(dá)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.2.2 csdhh在早期胚胎中的轉(zhuǎn)錄水平
        3.2.3 csshh在早期胚胎中的轉(zhuǎn)錄水平
        3.2.4 csptch1 x1在早期胚胎中的轉(zhuǎn)錄水平
        3.2.5 csptch1 x2在早期胚胎中的轉(zhuǎn)錄水平
        3.2.6 cssmo在早期胚胎中的轉(zhuǎn)錄水平
        3.2.7 csgli1在早期胚胎中的轉(zhuǎn)錄水平
    3.3 討論
4 半滑舌鰨csshh、csdhh、csptch1 x1、csptch1 x2、cssmo、csgli1在雌雄成魚不同組織的表達(dá)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 csdhh基因在成魚不同組織中的轉(zhuǎn)錄水平
        4.2.2 csshh基因在成魚不同組織中的轉(zhuǎn)錄水平
        4.2.3 csptch1 x1基因在成魚不同組織中的轉(zhuǎn)錄水平
        4.2.4 csptch1 x2基因在成魚不同組織中的轉(zhuǎn)錄水平
        4.2.5 cssmo基因在成魚不同組織中的轉(zhuǎn)錄水平
        4.2.6 csgli1基因在成魚不同組織中的轉(zhuǎn)錄水平
    4.3 討論
5 半滑舌鰨csshh、csdhh、csptch1x1、csptch1 x2、cssmo、csgli1在不同性腺發(fā)育時(shí)期的表達(dá)分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 在仔魚性腺中的轉(zhuǎn)錄水平
        5.2.2 在成魚性腺中的轉(zhuǎn)錄水平
    5.3 討論
6 csshh、csdhh及csptch1 x1基因啟動(dòng)區(qū)甲基化分析
    6.1 材料與方法
        6.1.1 性腺DNA提取
        6.1.2 啟動(dòng)區(qū)克隆
        6.1.3 甲基化檢測(cè)
    6.2 結(jié)果
    6.3 討論
7 半滑舌鰨csdhh、csptch1 x1及csptch1 x2在性腺中的組織原位雜交分析
    7.1 材料與方法
        7.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        7.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    7.2 結(jié)果
        7.2.1 半滑舌鰨csdhh mRNA的組織原位雜交結(jié)果
        7.2.2 半滑舌鰨csptch1 x1 mRNA的組織原位雜交結(jié)果
        7.2.3 半滑舌鰨csptch1 x2 mRNA的組織原位雜交結(jié)果
    7.3 討論
8 半滑舌鰨csptch1 x1及csptch1 x2在雌性染色體中的定位
    8.1 材料與方法
        8.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        8.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            8.1.2.1 染色體制備
            8.1.2.2 csptch1 x1及csptch1 x2基因在BAC文庫(kù)中定位
            8.1.2.3 熒光原位雜交
    8.2 結(jié)果
        8.2.1 半滑舌鰨雌雄染色體片的制備
        8.2.2 csptch1 x1及csptch1 x2基因在BAC文庫(kù)中定位
        8.2.3 csptch1 x1及csptch1 x2基因的雜交探針制備
        8.2.4 csptch1 x1及csptch1 x2基因在雌性染色體中的定位
    8.3 討論
9 半滑舌鰨csshh、csdhh基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及csshh、csptch1x1、csptch1x2原核表達(dá)載體構(gòu)建
    9.1 材料與方法
        9.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        9.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    9.2 結(jié)果
        9.2.1 csshh及csdhh基因信號(hào)肽預(yù)測(cè)結(jié)果
        9.2.2 csshh及csdhh基因真核過(guò)表達(dá)載體酶切結(jié)果
        9.2.3 csptch1 x1、csptch1 x2原核表達(dá)載體構(gòu)建
        9.2.4 csshh原核表達(dá)載體構(gòu)建及蛋白誘導(dǎo)
    9.3 討論
10 結(jié)論與展望
    10.1 結(jié)論
    10.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄



本文編號(hào)：4019186