Dmrt (Doble-sex and mab-3 relatated transcription factor)基因的主要功能是決定性別、分化性腺和形成組織和器官。為研究其在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)性腺發(fā)育和分化過(guò)程中的作用,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比對(duì)三角帆蚌轉(zhuǎn)錄組序列和RACE擴(kuò)增的方法,獲得了三角帆蚌Dmrt1基因(HcDmrt1)全長(zhǎng)cDNA,采用實(shí)時(shí)定量PCR的方法研究該基因在性腺發(fā)育和分化的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,HcDmrt1基因全長(zhǎng)為1 561 bp,ORF區(qū)(開放閱讀框區(qū)域) 1 161 bp,編碼386個(gè)氨基酸。編碼蛋白具有DM (Doublesex/MAB-3) Domain family保守結(jié)構(gòu)域。三角帆蚌2～10月齡個(gè)體性腺熒光定量結(jié)果顯示該基因參與了早期性腺發(fā)育;組織熒光定量結(jié)果顯示,HcDmrt1在各組織中均有表達(dá),但是在雌雄性腺組織中表達(dá)差異最大,雄性中表達(dá)量明顯高于雌性。性腺的原位雜交結(jié)果顯示,該基因主要在卵母細(xì)胞的細(xì)胞膜上檢測(cè)到表達(dá)信號(hào),在雄性性腺中,主要在濾泡腔中的精細(xì)胞觀察到信號(hào)。由此推測(cè),HcDmrt1基因參與了三角帆蚌的性腺發(fā)育過(guò)程。

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圖1三角帆蚌HcDmrt1基因cDNA全長(zhǎng)及推導(dǎo)的氨基酸序列

對(duì)HcDmrt1基因ORF區(qū)進(jìn)行同源性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其與池蝶蚌(Hyriopsisschlegelii)同源性最高。通過(guò)ClustalW軟件將HcDmrt1與其他物種的Dmrt1對(duì)比，再使用MEGA6.0建立NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹(圖4)。通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)三角帆蚌與池蝶蚌(Hyriopsis....

圖2Phyre2預(yù)測(cè)的HcDmrt1蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

圖1三角帆蚌HcDmrt1基因cDNA全長(zhǎng)及推導(dǎo)的氨基酸序列1.5HcDmrt1基因的組織表達(dá)差異分析

圖3HcDmrt1與不同物種Dmrt1氨基酸序列比對(duì)

各組織熒光定量結(jié)果顯示(圖5),HcDmrt1在雄性中的相對(duì)表達(dá)量都比雌性高，在性腺和外套膜中的表達(dá)差異極顯著；斧足中表達(dá)差異顯著，在肝和鰓中表達(dá)差異不顯著。2～10月齡性腺熒光定量結(jié)果顯示(圖6),HcDmrt1在2月左右高表達(dá)，隨后表達(dá)量下降，在5～7月齡左右表達(dá)量再次上升，....

圖3HcDmrt1與不同物種Dmrt1氨基酸序列比對(duì)

圖3HcDmrt1與不同物種Dmrt1氨基酸序列比對(duì)圖4不同物種HcDmrt1基因氨基酸序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹

本文編號(hào)：3990949