羅非魚是世界性的重要水產(chǎn)養(yǎng)殖對象之一,是聯(lián)合國糧農(nóng)組織向全世界推廣的優(yōu)良養(yǎng)殖魚類,我國羅非魚養(yǎng)殖產(chǎn)量居世界第一位,其中尼羅羅非魚養(yǎng)殖最為廣泛。尼羅羅非魚體型、生長速度等性狀方面在雌雄不同性別之間存在較大的差異,雄魚的生長速度約比雌魚快40-50%,而到性成熟時雄魚個體明顯大于雌魚,嚴(yán)重影響商品魚的整體出池,降低了尼羅羅非魚產(chǎn)量和質(zhì)量。另外由于繁殖快、成熟早,尼羅羅非魚在養(yǎng)殖過程中極易出現(xiàn)繁殖過剩、密度過大、群體生長受阻、營養(yǎng)不良、個體過小等不利情況,從而直接影響羅非魚的上市規(guī)格。開展性別控制技術(shù)研究,進(jìn)行全雄羅非魚的育種,具有重要的意義。對于不同性別尼羅羅非魚遺傳差異進(jìn)行分析,將有助于提高全雄羅非魚的育種效率 利用退火控制引物技術(shù)(annealing control primer)對尼羅羅非魚不同性別肌肉組織差異表達(dá)基因進(jìn)行篩選,選擇20對ACP隨機(jī)引物分別對從同等條件下養(yǎng)殖的尼羅羅非魚群體中的雌、雄魚各5尾組成cDNA池進(jìn)行差異顯示PCR擴(kuò)增,獲得8個差異表達(dá)的ESTs。除3個為未知基因外,其余5個分別為60S核糖體蛋白(RL3)、肌型肌酸激酶M2-CK、小白蛋白p樣蛋白、轉(zhuǎn)錄因子S...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 尼羅羅非魚的生物學(xué)特征
    2 魚類性別相關(guān)基因及性別特異標(biāo)記研究
        2.1 魚類性別和性染色體類型
            2.1.1 魚類性別
            2.1.2 魚類的性染色體類型
        2.2 魚類性別相關(guān)基因及性別特異標(biāo)記的研究進(jìn)展
            2.2.1 魚類性別決定基因研究概況
                2.2.1.1 Sox基因
                2.2.1.2 DMY/DMRT1Y基因
            2.2.2 魚類性別相關(guān)分子標(biāo)記的研究概況
                2.2.2.1 RAPD及其在魚類性別決定研究中應(yīng)用現(xiàn)狀
                2.2.2.2 SSR技術(shù)及其在魚類性別決定研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀
                2.2.2.3 AFLP及其在魚類性別鑒定研究現(xiàn)狀
                2.2.2.4 ACP技術(shù)的基本原理及研究進(jìn)展
                2.2.2.6 SSH技術(shù)的原理及其研究現(xiàn)狀
    3 本研究的目的和意義
第二章 尼羅羅非魚雌雄魚肌肉組織差異表達(dá)基因的篩選
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 試驗(yàn)魚
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)用主要儀器和試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 本實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容和技術(shù)路線
            1.2.2 總RNA提取及檢測
            1.2.3 感受態(tài)的制備
            1.2.4 尼羅羅非魚雌雄肌肉組織差異表達(dá)基因的篩選
                1.2.4.1 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈
                1.2.4.2 20對ACP隨機(jī)引物篩選雌雄肌肉組織差異表達(dá)基因
                1.2.4.3 PCR產(chǎn)物分離與純化
                1.2.4.4 純化產(chǎn)物連接
                1.2.4.5 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化
                1.2.4.6 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物測序
                1.2.4.7 測序結(jié)果分析
            1.2.5 差異表達(dá)基因的表達(dá)特征分析
                1.2.5.1 半定量PCR
                1.2.5.2 實(shí)時定量PCR分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 ACP方法獲得尼羅羅非魚雌雄差異表達(dá)基因
            2.1.1 總RNA提取的結(jié)果
            2.1.2 ACP方法獲得的尼羅羅非魚性別差異基因
            2.1.3 差異表達(dá)序列的比對結(jié)果
        2.2 差異表達(dá)基因的表達(dá)分析
            2.2.1 半定量PCR結(jié)果
            2.2.2 實(shí)時熒光定量PCR
                2.2.2.1 ACP3-X的定量表達(dá)分析
                2.2.2.2 ACP5-Y的定量表達(dá)分析
                2.2.2.3 ACP6-Y的定量表達(dá)分析
                2.2.2.4 ACP12-X的定量表達(dá)分析
                2.2.2.5 ACP14-X的定量表達(dá)分析
                2.2.2.6 ACP15-X的定量表達(dá)分析
                2.2.2.7 ACP18-X的定量表達(dá)分析
                2.2.2.8 ACP19-X的定量表達(dá)分析
    3 討論
        3.1 ACP技術(shù)的可行性
        3.2 差異基因的篩選結(jié)果分析
第三章 、尼羅羅非魚雌魚基因組差異基因的篩選
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 試驗(yàn)魚
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)用主要儀器和試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 本實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容和技術(shù)路線
            1.2.2 基因組DNA的提取與檢測
                1.2.2.1 基因組DNA的抽提
                1.2.2.2 DNA純度檢測
            1.2.3 尼羅羅非魚雌魚(XX)消減文庫的構(gòu)建
                1.2.3.0 鏈DNA RsaⅠ酶切
                1.2.3.1 Tester DNA接頭連接
                1.2.3.2 第一輪雜交
                1.2.3.3 第二輪雜交
                1.2.3.4 第一輪PCR
                1.2.3.5 第二輪PCR
                1.2.3.6 PCR產(chǎn)物純化
                1.2.3.7 連接pMD18-T載體
                1.2.3.8 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化
                1.2.3.9 庫容量及插入片段大小檢測
            1.2.4 序列測定和分析
                1.2.4.1 序列測定
                1.2.4.2 序列分析
            1.2.5 差異DNA片段的PCR驗(yàn)證
    2 結(jié)果與分析
        2.1 尼羅羅非魚雌魚消減文庫構(gòu)建
            2.1.1 RsaⅠ酶切結(jié)果
            2.1.2 PCR擴(kuò)增結(jié)果
            2.1.3 文庫的質(zhì)量分析
        2.2 序列測定和分析
            2.2.1 序列的測定與比對
            2.2.2 GO功能分析
            2.2.3 KEGG分析
        2.3 PCR驗(yàn)證結(jié)果
    3 討論
第四章 、尼羅羅非魚超雄魚基因組差異基因的篩選
    1 材料與方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 尼羅羅非魚雌魚消減文庫構(gòu)建
            2.1.1 RsaⅠ酶切結(jié)果
            2.1.2 PCR擴(kuò)增結(jié)果
            2.1.3 文庫的質(zhì)量分析
        2.2 序列測定和分析
            2.2.1 序列的測定與比對
            2.2.2 GO功能分析
            2.2.3 KEGG分析
        2.3 PCR驗(yàn)證結(jié)果
    3 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄Ⅰ



本文編號：3975925