草魚(Ctenopharyngodon idella)是世界養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的魚類。草魚易受病原體感染,一旦感染又易引發(fā)大面積死亡,給養(yǎng)殖業(yè)帶來重大損失。由于水產(chǎn)疫苗的匱乏和施藥方式易對水體造成污染,選育抗病力強(qiáng)的草魚良種,成為了防治草魚病害的有效途徑。PI3K/AKT信號(hào)通路,是一種以磷酸化為基礎(chǔ)的信號(hào)通路。有關(guān)草魚PI3K/AKT信號(hào)通路的研究還是空白。本論文克隆了草魚三個(gè)PI3K/AKT相關(guān)基因:AKT1、AKT3以及NFIL3,分析了基因序列和預(yù)測氨基酸序列的理化性質(zhì),根據(jù)同源氨基酸序列構(gòu)建了系統(tǒng)進(jìn)化樹。用嗜水氣單胞菌人工感染草魚,檢測了3個(gè)基因在4種草魚免疫相關(guān)組織中的表達(dá)情況。選取NFIL3基因作為深化對象,研究了其超表達(dá)對于細(xì)菌入侵草魚CIK細(xì)胞的影響。取得了以下結(jié)果:1.通過同源克隆和RACE法得到草魚AKT1、AKT3和NFIL3基因的全長c DNA序列,分別為1554bp,2808bp,2018bp;分別含有編碼384(1155bp),479(1440bp),468(1407bp)個(gè)氨基酸的開放閱讀框,預(yù)測出的氨基酸序列均無信號(hào)肽位點(diǎn)。2.BLAST分析發(fā)現(xiàn),草魚AKT...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1草魚AKT1基因cDNA擴(kuò)增圖：圖a為AKT1基因3’RACE擴(kuò)增產(chǎn)物，

沒有信號(hào)肽切割位點(diǎn)。ScanProsite結(jié)果顯示AKT1預(yù)測氨基酸序列有一個(gè)典型的PH區(qū)域-位于氨基酸殘基5-108位點(diǎn)，一個(gè)蛋白激酶區(qū)域-位于氨基酸殘基143-384位點(diǎn)，還有一個(gè)絲氨酸/蘇氨酸激酶活化位點(diǎn)-位于氨基酸殘基263-275位點(diǎn)，這三個(gè)特征與A....

圖2-2使用ClustalW對不同魚類的AKT1氨基酸進(jìn)行比對分析

圖2-2使用ClustalW對不同魚類的AKT1氨基酸進(jìn)行比對分析。黑色直線表示PH區(qū)域，黑色線段表示蛋白激酶區(qū)域，黑色矩形框表示絲氨酸/蘇氨酸激酶活化位點(diǎn)。GenBank登錄號(hào)分別為：zebrafish（斑馬魚，NP_001268730.1）;fugu（紅....

圖2-3草魚AKT3基因cDNA擴(kuò)增圖：圖a為AKT3基因3’RACE擴(kuò)增產(chǎn)物，圖b為AKT3

確定了沒有信號(hào)肽切割位點(diǎn)。ScanProsite結(jié)果顯示AKT1蛋白有一個(gè)典型的PH（pleckstrinhomology）區(qū)-位于氨基酸殘基5-107位點(diǎn)，一個(gè)蛋白激酶區(qū)域-位于氨基酸殘基148-405位點(diǎn)，還有一個(gè)絲氨酸/蘇氨酸激酶活化位點(diǎn)-位于氨基酸殘基2....

圖2-4使用ClustalW對不同物種的AKT3氨基酸進(jìn)行比對分析

圖2-4使用ClustalW對不同物種的AKT3氨基酸進(jìn)行比對分析。黑色帶箭頭直線表示PH區(qū)域，黑色線段表示蛋白激酶區(qū)域，黑色虛線矩形框表示絲氨酸/蘇氨酸激酶活化位點(diǎn)。各序列的GenBank登錄號(hào)分別為：zebrafish（斑馬魚，Daniorerio，NP....

本文編號(hào)：3961445