海參是我國沿海城市重要的經(jīng)濟養(yǎng)殖物種,近年來,由于集約化養(yǎng)殖,導(dǎo)致其生存環(huán)境日益惡化,使海參病害問題日益嚴重。研究表明,海參在面對微生物感染時,會出現(xiàn)兩條免疫應(yīng)激策略。產(chǎn)生抗菌肽,如海參溶菌酶,通常情況下直接破壞病原菌機體;產(chǎn)生過量活性氧(Reactive oxygen species,ROS)。但是,過量的ROS本身對機體具有嚴重的毒害作用。生物體的抗氧化防御系統(tǒng)(SOD和CAT),可以平衡ROS,維持機體的氧化還原平衡。因此深入研究海參的相關(guān)免疫機制,了解免疫相關(guān)蛋白的性質(zhì)和功能將能有效增強海參抗病能力,對深入探討仿刺參的抗氧化及免疫功能有著重要的作用。本研究主要深入討論了海參溶菌酶及過氧化氫酶的作用和功能。在活體水平上,實驗首次分析了海參i型溶菌酶在各個組織中的分布,初步確定了海參溶菌酶的免疫功能。研究發(fā)現(xiàn),海參溶菌酶的量在觸手中最多,呼吸樹次之,而在腸中最少,體腔細胞和體壁中海參溶菌酶的量基本持平。燦爛弧菌免疫刺激后,海參體腔中的海參溶菌酶含量持續(xù)增加,在48 h時含量達到最多,之后海參溶菌酶含量會逐漸降低。在細胞水平上,利用基因沉默技術(shù)分析了海參i型溶菌酶對病原菌的免疫抑制作...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１海參各組織ＲＮＡ提取??

７〇〇ｂｐ—??５００ｂｐ—??圖３－２內(nèi)參基因（３－ａｃｔｉｎ的ＰＣＲ擴增??Ｆｉｇ．?３－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｎａｌ?ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ?ｇｅｎｅ?ｐ－ａｃｔｉｎ??３０??

圖３－２內(nèi)參基因（３－ａｃｔｉｎ的ＰＣＲ擴增??

法提取海參各個組織的總ＲＮＡ。??１．５％?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??圖３－１海參各組織ＲＮＡ提取??Ｆｉｇ．?３－１?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?ｓｅａ?ｃｕｃｕｍｂｅｒ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｓ??１．５％瓊脂糖凝膠電泳檢測ＲＮＡ....

圖３－３海參溶菌酶組織分布??Ｆｉｇ．?３－３?Ｔｉｓｓｕｅ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｅａ?ｃｕｃｕｍｂｅｒ?ｌｙｓｏｚｙｍｅ??利用ＲＴ－ＰＣＲ檢測海參溶菌酶蛋白在各個組織中的分布

法提取海參各個組織的總ＲＮＡ。??１．５％?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??圖３－１海參各組織ＲＮＡ提取??Ｆｉｇ．?３－１?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?ｓｅａ?ｃｕｃｕｍｂｅｒ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｓ??１．５％瓊脂糖凝膠電泳檢測ＲＮＡ....

圖３－４海參體腔細胞ＲＮＡ提取??－

取總ＲＮＡ，?１．５％瓊脂糖凝膠電泳檢測ＲＮＡ提取產(chǎn)物。結(jié)果顯示，各個時間段提取的產(chǎn)??物都有三條明顯的條帶，與ＲＮＡ條帶基本一致，分別為２８Ｓ、１８Ｓ、５Ｓ，說明提�。遥危�??成功（圖３－４）。對各個組織的ＲＮＡ進行反轉(zhuǎn)錄，以內(nèi)參基因驗證，結(jié)果表明轉(zhuǎn)錄成功??（圖?３－５）。?....

本文編號：3958867