本研究以羅非魚養(yǎng)殖場患病魚體上分離到的無乳鏈球菌為疫苗菌株,以乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)為佐劑,采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備PLGA包埋無乳鏈球菌全菌及菌體超聲破碎后上清物的微球疫苗,探討了粒徑適于口服的微球疫苗的制備工藝,測定了微球的包埋和釋放特性,最后經(jīng)口服免疫羅非魚,研究了羅非魚對口服緩釋微球疫苗的特異性和非特異性免疫反應(yīng)以及其對羅非魚的免疫保護(hù)效果。主要內(nèi)容與結(jié)果如下： 1、無乳鏈球菌PLGA微球疫苗的制備條件及其特性分析 通過控制變量法探討微球疫苗制備過程中PLGA濃度、PVA(聚乙烯醇)濃度和外水相體積對所制備微球粒徑的影響。顯微鏡觀察結(jié)果顯示隨著PLGA濃度、PVA濃度和外水相體積的增加,上清微球平均粒徑均隨之增大。最終確定上清微球制備條件為PLGA濃度25mg·mL^-1、PVA濃度為1mg·mL^-1、外水相體積20mL。全菌微球制備條件與上述的相比,僅PVA濃度調(diào)整為2mg·mL^-1。掃描電鏡觀察顯示全菌和上清微球平均粒徑分別為9.4μm和3.9μm,微球均呈球形。BCA法測定包封率分別為68.07%和6...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1無乳鏈球菌菌體超聲處理效果.A.超聲處理前；B.超聲處理后Fig.2-1UltrasonictreatmenteffectofGBS.A.beforeultrasonication；B.afterultrasonication

經(jīng)福爾馬林滅活的GBS菌液超聲處理后,革蘭氏染色觀察可見GBS鏈狀菌體斷幵，由鏈狀分布變?yōu)榍驙罨螂p球分布（圖2-1)，這有利于包埋進(jìn)PLGA微球。A / >jrv ^ ?,、、-???-、、一. 、從Z ；*. ?,、? X\ ?.\ ” 4-圖2-1無乳鏈球菌菌體超....

圖2-2全菌微球包埋效果（左）及其電鏡觀察（右）

粒徑分布相對集中，有未包埋入微球的菌體吸附在微球表面（圖2-2)。經(jīng)SDS-PAGE檢測，上清微球溶解液中有蛋白存在，說明破碎后上清也有效包埋入微球。電鏡照片顯示微球表面光滑無粘連，粒徑分布較均勻（圖2-3)。PBS微球粒徑分布范圍較廣，且較大的微球表面有小孔（圖2-4)。圖2-....

圖2-3上清微球包埋效果及電鏡觀察M.蛋內(nèi)標(biāo)記；].GBS破碎后沉淀；2.GBS破碎后上清；3.上清微球溶解液

經(jīng)SDS-PAGE檢測，上清微球溶解液中有蛋白存在，說明破碎后上清也有效包埋入微球。電鏡照片顯示微球表面光滑無粘連，粒徑分布較均勻（圖2-3)。PBS微球粒徑分布范圍較廣，且較大的微球表面有小孔（圖2-4)。圖2-2全菌微球包埋效果（左）及其電鏡觀察（右）Fig.2-2The....

圖2-4電鏡下的PBS微球

電鏡照片顯示微球表面光滑無粘連，粒徑分布較均勻（圖2-3)。PBS微球粒徑分布范圍較廣，且較大的微球表面有小孔（圖2-4)。圖2-2全菌微球包埋效果（左）及其電鏡觀察（右）Fig.2-2Theembeddingeffectofmicroparticlecontain....

本文編號：3947671