發(fā)布時間：2024-04-02 02:31

　　近年來,大鯢養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)得到了快速發(fā)展。同時,在大鯢養(yǎng)殖過程中也出現(xiàn)了各種各樣的病害問題,這已經(jīng)嚴重威脅到了大鯢養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。因此,對于養(yǎng)殖過程中大鯢的健康狀況的研究可以促進大鯢健康養(yǎng)殖。大鯢體表黏液凝集素(ADL)是大鯢的重要免疫分子之一,它的數(shù)量變化可以直接反映出大鯢的健康狀況。本論文利用ELISA方法建立了一種快速檢測ADL數(shù)量的方法,以期為大鯢的健康養(yǎng)殖提供基礎數(shù)據(jù)。具體工作如下:1.以提取純化后的ADL為完全抗原,經(jīng)免疫程序免疫新西蘭白兔制備抗ADL的抗血清,獲得的抗血清效價為51200。用BSA、OVA、MCL-T來檢測抗體特異性,結果表明得到的抗血清特異性較好。2.以抗ADL抗體為基礎建立間接非競爭ELISA方法,并優(yōu)化了抗原抗體最佳稀釋度、抗體反應時間、顯色時間等實驗條件。結果表明,多克隆抗體的最適稀釋度為1:3000,一抗反應時間為1 h,二抗反應時間為1 h,顯色時間為20 min,在31.25¹000 ng/mL的范圍內(nèi),ADL濃度的對數(shù)值和吸光度之間具有較好的線性關系,添加回收率為91.5¹09.5%。重復性實驗表明,其板...

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 大鯢簡介
    1.2 凝集素
        1.2.1 凝集素的定義
        1.2.2 凝集素的分類
        1.2.3 凝集素的生物學性質
        1.2.4 大鯢體表黏液
    1.3 酶聯(lián)免疫測定方法
    1.4 課題研究目的、意義及內(nèi)容
        1.4.1 課題研究目的及意義
        1.4.2 課題研究內(nèi)容
    1.5 技術路線
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 免疫對象
        2.1.2 材料與試劑
        2.1.3 相關溶液的配制
        2.1.4 儀器與設備
    2.2 大鯢凝集素多克隆抗體的制備及評價
        2.2.1 多克隆抗血清的制備
        2.2.2 抗血清的分離及保存
        2.2.3 抗ADL效價測定
        2.2.4 抗ADL抗體特異性
    2.3 間接非競爭ELISA方法的建立及優(yōu)化
        2.3.1 抗原最佳包被濃度及抗體稀釋度的確定
        2.3.2 包被液的選擇
        2.3.3 包被條件的選擇
        2.3.4 封閉液的選擇
        2.3.5 一抗反應時間的選擇
        2.3.6 二抗反應時間的選擇
        2.3.7 顯色時間的選擇
        2.3.8 間接ELISA標準曲線的繪制
        2.3.9 間接ELISA檢測方法的評價
    2.4 大鯢樣本的測定
        2.4.1 大鯢樣本的處理
        2.4.2 大鯢樣本總蛋白含量測定
        2.4.3 大鯢樣本ADL含量檢測
    2.5 ADL檢測試劑盒的組裝及評價
3 結果與討論
    3.1 抗ADL抗體制備及評價
    3.2 抗原抗體最佳稀釋度的選擇
    3.3 包被液的選擇
    3.4 包被條件的選擇
    3.5 封閉液的選擇
    3.6 一抗反應時間的選擇
    3.7 二抗反應時間的選擇
    3.8 顯色時間的選擇
    3.9 ADL間接ELISA標準曲線的繪制
    3.10 間接ELISA方法的評價
        3.10.1 添加回收實驗
        3.10.2 精密度實驗
    3.11 大鯢樣本測定
        3.11.1 大鯢樣本總蛋白含量測定
        3.11.2 大鯢樣本ADL含量檢測
    3.12 ADL試劑盒評價
        3.12.1 37℃保存實驗
        3.12.2 低溫保存實驗
結論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的論文目錄
致謝



本文編號：3945683