為了體外表達(dá)黑頭軟口鰷上皮瘤細(xì)胞(EPC)I型干擾素(IFN-1),本實(shí)驗(yàn)通過RTPCR從EPC中擴(kuò)增ifn-1基因,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a-IFN-1,并轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞Transetta(DE3),體外純化后檢測其抗病毒活性。結(jié)果顯示,ifn-1編碼區(qū)大小為552 bp,編碼184個氨基酸,與草魚干擾素1(CiIFN1)親緣關(guān)系最近。通過SDS-PAGE分析,重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a-IFN-1在宿主菌中可明顯表達(dá)約35 ku的融合蛋白條帶,且部分呈可溶性表達(dá),進(jìn)而通過親和純化可溶性重組IFN-1(rIFN-1),免疫新西蘭大白兔獲得效價較高的抗IFN-1多克隆抗體,可用于檢測細(xì)胞內(nèi)源性的IFN-1。定量PCR顯示rIFN-1與EPC細(xì)胞孵育可以誘導(dǎo)抗病毒蛋白Mx1的表達(dá),并抑制鯉春病毒血癥病毒(SVCV)引起的細(xì)胞病變(CPE)及SVCV的復(fù)制,表明rIFN-1具有抗病毒活性。

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