由酚氧化酶原激活系統(tǒng)調(diào)控的黑化作用在無脊椎動(dòng)物防御病原微生物入侵機(jī)體的過程中起到了重要作用。脂多糖和β-1,3-葡聚糖結(jié)合蛋白(LGBP)作為一種模式識(shí)別蛋白(PRP),已經(jīng)在昆蟲和蝦中證實(shí)能夠激活酚氧化酶原系統(tǒng)。基于此,我們探究LGBP在中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)這一重要的經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)中是否同樣能夠激活酚氧化酶原系統(tǒng)引發(fā)黑化作用等免疫反應(yīng)。通過定量PCR分析,發(fā)現(xiàn)LGBP基因在檢測的所有組織中都表達(dá),并且在血細(xì)胞、鰓、腸和腦中表達(dá)量更高。當(dāng)LPS和β-1,3-葡聚糖體內(nèi)攻毒中華絨螯蟹12 h時(shí),血細(xì)胞中LGBP的表達(dá)量明顯升高。通過原核表達(dá)技術(shù)和親和層析獲得了重組LGBP蛋白(rEsLGBP)。通過蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)rEsLGBP能夠結(jié)合所有的檢測菌(包括革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和真菌),同時(shí)發(fā)現(xiàn)該蛋白可以與LPS和β-1,3-葡聚糖這兩類病原相關(guān)分子模式(PAMP)結(jié)合而不與肽聚糖結(jié)合。將LGBP孵育的瓊脂糖鎳珠加入到血淋巴中,觀察到了明顯的血細(xì)胞脫顆�，F(xiàn)象以及對(duì)鎳珠的包裹作用。隨后,證實(shí)了1EsLGBP能夠誘導(dǎo)全血依賴的黑化作用并且驗(yàn)證了不同血淋巴組分對(duì)...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
內(nèi)容摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    第一節(jié) 無脊椎動(dòng)物先天免疫概述
        1.1 引言
        1.2 細(xì)胞免疫
        1.3 體液免疫
    第二節(jié) 無脊椎動(dòng)物酚氧化酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)概述
        2.1 引言
        2.2 酚氧化酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)的組成
        2.3 酚氧化酶原級(jí)聯(lián)反應(yīng)的激活
        2.4 酚氧化酶原級(jí)聯(lián)反應(yīng)的調(diào)控
    第三節(jié) 本研究的意義及技術(shù)路線
第二章 LGBP基因表達(dá)模式分析
    第一節(jié) 前言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 中華絨螯蟹體內(nèi)PAMP免疫注射、樣品收集
        2.2 EsLGBP的組織表達(dá)檢測
        2.3 三種PAMP免疫刺激后EsLGBP的誘導(dǎo)表達(dá)檢測
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 EsLGBP的組織表達(dá)分析
        3.2 三種PAMP免疫刺激后EsLGBP的誘導(dǎo)表達(dá)模式分析
    第四節(jié) 討論
第三章 rEsLGBP參與酚氧化酶原激活系統(tǒng)等免疫反應(yīng)研究
    第一節(jié) 前言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 重組rEsLGBP表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2 EsLGBP重組蛋白的表達(dá)、純化并復(fù)性
        2.3 r EsLGBP與不同病原菌及PAMP結(jié)合實(shí)驗(yàn)
        2.4 蛋白印跡檢測
        2.5 r EsLGBP的血細(xì)胞調(diào)理活性檢測(包裹作用)
        2.6 r EsLGBP誘導(dǎo)黑化作用的檢測
        2.7 E-GBP影響酚氧化酶酶活性的檢測
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 重組r EsLGBP的分析
        3.2 重組r EsLGBP與微生物和病原模式分子結(jié)合活性分析
        3.3 重組r EsLGBP的血細(xì)胞調(diào)理活性分析
        3.4 重組r EsLGBP誘導(dǎo)黑化作用的分析
        3.5 重組r EsLGBP對(duì)酚氧化酶酶活性的影響
    第四節(jié) 討論
第四章 EsLGBP體外干擾后,酚氧化酶原激活系統(tǒng)相關(guān)基因表達(dá)量的檢測
    第一節(jié) 前言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 中華絨螯蟹原代血細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 EsLGBP的體外干擾
        2.3 EsLGBP干擾后對(duì)PO-AS相關(guān)基因的檢測
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 干擾效果檢測
        3.2 干擾LGBP后,酚氧化酶原激活系統(tǒng)相關(guān)基因表達(dá)量的檢測
    第四節(jié) 討論
第五章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3926306